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5UTR和3UTR设计引物的方法
想知道表达质粒转染细胞后的mRNA水平,怎么设
引物
将质粒产生的mRNA和细...
答:
质粒表达的mRNA是没有
3
'
UTR和5
'
UTR的
,你可以在这两处和CDS上
设计
一个,然后相减,就是质粒表达的mRNA。
求助,race
引物
怎么
设计
呢?已知序列
答:
设计的时候5`和3`分开设计。
一端是指定引物,由试剂盒提供,软件自动寻找符合条件的引物
。所以你引物设计的条件也要预先设好,软件默认的设置不一定好用。至于产物大小,完全是靠估计的,毕竟UTR可长可短,所以PCR的延伸时间一开始都放长一些。
通过PCR怎样获得全长cDNA
答:
知道了就在两端
设计引物
,以cDNA为模板PCR扩增就行了;不知道就先把序列搞出来。
谁知道启动子的
引物
怎么
设计
,要求具体,越详细越好,而且是能实际操作的...
答:
这个一般要多试几次的,Forward的话从
5
‘
UTR
上游3000(一般的就够了)开始每隔500设置一个,Reverse的话设置在5‘UTR附近,可以进入mRNA。PCR之后转入带标记的载体看看Maker表不表达,表达的就是OK的,取长度最小值就可以。另外,可以去一些网站看看,他们都可以做些预测,这样可以少走些弯路。
如何
设计
启动子
引物
答:
这个一般要多试几次的,Forward的话从
5
‘
UTR
上游3000(一般的就够了)开始每隔500设置一个,Reverse的话设置在5‘UTR附近,可以进入mRNA。PCR之后转入带标记的载体看看Maker表不表达,表达的就是OK的,取长度最小值就可以。另外,可以去一些网站看看,他们都可以做些预测,这样可以少走些弯路。
银环蛇毒素的毒素与基因工程
答:
克隆到的B1链基因长5062bp,外显子1编码
5
,-
UTR
,24个氨基酸残基组成的信号肽,氨基酸残基1-5,外显子2编码氨基酸残基5-59,外显子3编码氨基酸残基59-61
和3
,-UTR。 Cheng等根据β-BGT的B1链启动子区域,非编码区,B1链cDNA分别
设计引物
,扩增从银环蛇提取的β-BGT的基因组,克隆到B1、B2、B4、B5、B6链的基因组,...
全长cDNA PCR
答:
这是由于
引物的
特异性不行!因为你的cDNA为600nt,加上200nt的poly(A),正好800nt。但是由于特异性不好,引物结合位点可能是600到800范围内,所以会出现拖带!这也解释了比我产物还要大的会是什么这个问题。所以你还是重新
设计引物
吧。另外,可以使用凝胶提纯,具体
方法
就不好多说了,请给我分吧,...
RT-PCR根据什么序列
设计引物
答:
根据CCDS区
设计
,可以设计跨内含子或不跨内含子,从
3
‘端开始寻找适合的下游
引物
,然后往上寻找适合的上游引物,扩增片段大概150~200bp
全式金反转录试剂盒可以合成
3
’和
5
’
UTR
吗
答:
全式金反转录试剂盒可以合成
3
’和
5
’
UTR
本质是一样的。有一点细微区别,后者是生物的自然发生的过程,前者是人工进行的过程。逆转录是RNA类病毒形成自己的DNA并整合到宿主细胞的DNA上,以RNA为模板形成DNA的过程。反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工...
如何从人体基因组中扩增已知蛋白基因的
3
'
UTR
答:
扩增
UTR
你直接到网上找该基因的mRNA,CDS后面的序列均为UTR,直接
设计引物
扩增即可。UTR不像编码序列,在基因组里面还有外显子和内含子之分。
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