问题：有目的基因，293t细胞，如何用慢病毒载体整合入293t细胞，求详细过程

Question

如题所述

Answer 1

慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)：

第一天：
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天：
1.转染293FT细胞。
1. 500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2. 500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3. 5min后，将，溶液混合，室温静止30min
4. 从6孔板中吸出1ml培养基，然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物。
2. 6-10h后，移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以正常培养液DMED+
10%FBS（从此刻开始算时间）。
第三天：
3.转染24h后，荧光显微镜下观察，转染效率应达到70%以上
第四天：
4. 48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤， 同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4. 感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。
第五天：
5. 72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清，然后再次感染目的细胞。
6. 一般感染48h后，就能见到明显的荧光。追问

2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
这是什么东西？你的内容是包装试剂盒说明书上的吧，我要自己包装，但很多试剂我没有，比如Opti-MEM 脂质体2000

Answer 2

psPXA2是可以表达慢病毒的外壳质粒，其表达产物可以通过粘附机制更易穿过细胞膜。
PMD2.5G为慢病毒的膜蛋白质粒。
pWPXLd为慢病毒载体（个人理解）。