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细胞应加入多少慢病毒
怎么用
慢病毒
感染目的
细胞
?慢病毒感染细胞的具体操作是什么?
答:
体外感染操作 以HEK293细胞为例,使用完全培养液稀释
慢病毒
,计算所
需病毒
量(如:106
细胞需
107 TU病毒,1×108 TU/mL的病毒滴度下需100μL)。确保细胞处于良好生长状态,必要时可
加入
助感染试剂ADV-HR增强感染效率。 具体操作步骤 第一天:接种3-5×104 HEK 293细胞,培养液300μL,保持...
慢病毒
空载体导入
细胞
后会影响细胞的增殖吗
答:
2.设置不同MOI值的感染组,通常设立1,2,5,10,20,50,100的感染组别,各做两个孔,一个孔中
加入
终浓度为5 μg/ml的polybrene,另一组不加.Polybrene可以促进
病毒
对
细胞
的侵染,但在少数情况下它对细胞有伤害.常用的对照病毒包括CMV-GFP,EF1a-GFP,UbiC-GFP,PGK-GFP.一般细胞里面CMV启动子的表达活性是...
如何应对
病毒
感染
细胞
效率低的难题?
答:
病毒
感染
细胞
本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中
加入
5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费...
问题:有目的基因,293t
细胞
,如何用
慢病毒
载体整合入293t细胞,求详细过...
答:
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上 第四天:4. 48h收获含
病毒
的上清,0.45um滤膜过滤, 同时再往6孔板中
加入
2ml完全培养基 4. 感染
细胞
:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。第五天:5. 72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞。6...
悬浮
细胞病毒
转染铺6孔板
要多少细胞
答:
1、
慢病毒
转染前18-24小时,将贴壁
细胞
以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,
加入
适量病毒悬液。37℃孵育。3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释...
慢病毒
如何稀释
答:
稀释
慢病毒
时,从-80℃冰箱取出适量病毒,置于4℃融化后,用无血清的
细胞
基础 培养基或1×PBS (无Ca 2+ /Mg 2+ )稀释至合适滴度后进行细胞感染实验,稀 释后的病毒4℃保存(请尽量在三天内用完),不建议进行分装冻存。
怎样提高Jurkat,E6-1
细胞
转染效率
答:
A.
细胞
接种:转染前一天接种细胞,每孔 500 μl 培养基(不可加抗生素),使细胞在转染时密度在30-40% 。B. siRNA-RFectSP混合物准备:1. 6pmol siRNA 用50μl无血清培养基稀释。2. 2μl RFectSP用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀,室温孵育5min。注意:确保在25 min内执行第三步操作,...
病毒
感染
细胞
时没有加polybrene有什么后果
答:
普通的
慢病毒
不加感染效率会低。Polybrene是带正电的小分子,抵消病毒囊膜和
细胞
膜表面的阴离子,提高慢病毒对细胞的感染效率,通常
加入
polybrene能提高感染效率2~10倍。但是polybrene对部分细胞有毒性,可1~10μg/ml,6-24h内无毒为标准,实验摸索浓度。非VSVG包膜的病毒不用polybrene,具体情况具体分析...
怎样构建
慢病毒
载体用来标记原代
细胞
的细胞骨架?
答:
2.然后将重组质粒以及辅助质粒共转染
细胞
,可以用脂质体法,
慢病毒
配套细胞一般为293。3.收集慢病毒,浓缩。4.用慢病毒转染原代细胞。做好先做预实验。5.重组蛋白(例如,GFP-actin)在细胞内表达后,自然的混入细胞骨架中,将之标记绿色荧光。1-3步骤可以委托公司进行,拿到慢病毒液后可以进行转染,...
2018-12-31
答:
1.
细胞
培养:B16F10和CD8+T细胞 2.
慢病毒
Cas9-Blast与pCMV-dR8.91和pCMV-VSV-G质粒共转染到HEK293T细胞中,然后收割病毒滴定后储存。该步的目的是对慢病毒Cas9-Blast进行包装,得到能够将目的序列稳定插入到宿主细胞中的病毒颗粒该病毒颗粒用于感染宿主细胞B16F10。3.将慢病毒Cas9-Blast感染B16F10后...
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