慢病毒载体慢病毒载体构建基本原理

Question

如题所述

Answer 1

慢病毒载体的构建基于两部分关键组件：包装成分和载体成分。包装成分是从HIV-1基因组中精简出来，去除了负责包装、逆转录和整合的顺式作用序列，它能够提供制造病毒粒子所需的蛋白质。通常，这个部分由两个质粒承载，一个质粒负责表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒则表达Env蛋白，这样做的目的是降低变成野生型病毒的风险。

构建过程中，将这三种质粒同时转染到如人肾293T细胞中，细胞会产生一次性感染能力但无法自我复制的HIV-1载体颗粒，携带目标基因。载体成分与包装成分相辅相成，包含HIV-1的包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时，它还具备异源启动子控制下的多克隆位点，用于插入目的基因。

为了进一步降低同源重组恢复野生型病毒的风险，设计时会尽量减少包装成分与载体成分之间的同源性。例如，可以将包装成分的5′LTR替换为巨细胞病毒(CMV)的立即早期启动子，将3′LTR替换为SV40的polyA尾序列，以增强安全性和稳定性。