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荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
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推荐答案 2017-01-12
荧光定量PCR的扩增区段比较小,也就200bp左右,而且一般以cDNA为模板.如果不注意引物设计的话,很可能落在同一个外显子内.此时,无论cDNA还是基因组DNA都会给出同样的信号,也就是说定量会出现误差.如果引物跨内含子,则cDNA会给出信号,而基因组DNA由于引物无法完全配对而没有信号,也就避免了基因组DNA的影响.(这个我是搬运过来的,希望对你有帮助)
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荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
答:
因为你的CDNA中可能混有DNA,
跨内含子设计引物是为了避免DNA中的片段被扩增出来影响实验结果
荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
答:
引物若跨内含子的话,引物仅能以3'端的一小部分结合基因组DNA,这样的话Tm会很低
。在较高的退火温度下,引物几乎无法和基因组DNA结合来引发聚合,而主要是与能够完全配对的cDNA结合并引发反应。
荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
答:
因为模板是mRNA,用来检测基因的表达量
,mRNA经过修饰后没有内含子
【求助】Real-time
PCR 引物设计
求助
答:
博凌科为-为你解答:1.跨越内含子主要为了避免抽提、反转录过程中残留基因组DNA污染的干扰
,因为基因组DNA是不会存在两个外显子连续这样一段序列的,如果引物只在一个外显子上就要冒这种风险2.个人感觉引物能不能工作,上下游引物的Tm值要接近,这个最重要,至于别的发卡,茎环等就要看运气了,不行...
荧光定量
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引物设计为什么要跨内含子
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随着PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时
荧光定量PCR
技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术...
如何进行
引物设计
?
答:
2、扩增跨度:(1)长度:200~500bp(最好100~300bp,也可以小于400);(2)设计跨内含子的引物:即前后引物之间
要跨
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跨内含子设计引物
的目的是为了扩增时只扩增mRNA序列,而不扩增基因组DNA...
pcr
product size怎么办
答:
我说个大概吧,
荧光定量PCR引物设计
一般都是
跨内含子
(这样能去除DNA的干扰),另外TM值在50-55左右,长度20bp左右,PCR product size 一般为150bp左右,最好不要有交叠试的二聚体。其实你能保证跨内含子,一般都OK的。
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