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荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
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推荐答案 2017-01-19
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其他回答
第1个回答 2017-01-19
为了保证是转录水平的基因表达量
相似回答
荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
?
答：
荧光定量PCR
的扩增区段比较小，也就200bp左右，而且一般以cDNA为模板。如果不注意
引物设计
的话，很可能落在同一个外显子内。此时，无论cDNA还是基因组DNA都会给出同样的信号，也就是说定量会出现误差。如果
引物跨内含子
，则cDNA会给出信号，而基因组DNA由于引物无法完全配对而没有信号，也就避免了基因...
荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
答：
因为你的CDNA中可能混有DNA，
跨内含子设计引物是为了避免DNA中的片段被扩增出来影响实验结果
荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计
答：
因为模板是mRNA，用来检测基因的表达量
，mRNA经过修饰后没有内含子
荧光定量
Real time
引物设计为什么要跨内含子
答：
随着PCR 反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。实时
荧光定量PCR
技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术...
【求助】Real-time
PCR 引物设计
求助
答：
博凌科为-为你解答：1.跨越
内含子
主要为了避免抽提、反转录过程中残留基因组DNA污染的干扰，因为基因组DNA是不会存在两个外显子连续这样一段序列的，如果
引物
只在一个外显子上就要冒这种风险2.个人感觉引物能不能工作，上下游引物的Tm值要接近，这个最重要，至于别的发卡，茎环等就要看运气了，不行...
一步法
引物
是
跨内含子
嘛
答：
一步法
引物
是
跨内含子
。一步法引物包括两个引物，一个位于外显子的5'端，另一个位于内含子的3'端，从而使
PCR
扩增跨越内含子。这种方法可以用于检测基因组DNA中的基因剪接变异。所以一步法引物是跨内含子的。
如何进行
引物设计
?
答：
2、扩增跨度：（1）长度：200~500bp（最好100~300bp，也可以小于400）；（2）设计跨内含子的引物：即前后引物之间
要跨
过不同内含子界限以区别或消除gDNA的扩增。DNA转录mRNA时，内含子会被剪切，mRNA理论上保留的都是外显子；
跨内含子设计引物
的目的是为了扩增时只扩增mRNA序列，而不扩增基因组DNA...
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