根据GenBank中p53基因的部分序列),设计引物,确定RT-PCR的参数，检测 p53基因在血细胞中的表达情况.

Question

根据GenBank中p53基因的部分序列（GenBank登录号:AF136270.1），设计引物，确定RT-PCR的参数，检测 p53基因在血细胞中的表达情况。 已经登陆http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AF136270.1 求大神指导大致过程，以前完全没有接触过，无从下手，在线等！！！谢谢

Answer 1

现在你到了基因序列的网站，最下面的那一大段就是外显子2到9的序列。一般设计RT-PCR引物需要跨外显子交界，这样可以提高特异性。

你可以先拷贝外显子2的序列（216..289）

atgga ggagccgcag tcagatccta gcgtcgagcc ccctctgagt caggaaacat tttcagacct atggaaact

然后再拷贝外显子3的序列（407..428）

actt cctgaaaaca acgttctg

把这两段接在一起

atgga ggagccgcag tcagatccta gcgtcgagcc ccctctgagt caggaaacat tttcagacct atggaaact actt cctgaaaaca acgttctg

然后到下面这个网页设计引物
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/

把刚才拼接得到的序列贴到最上面的方框中，然后点最下面的按钮。过一会就点“check”，会得到几组引物。结果的最上方是位置示意图。你确认一下你的reserve primer要跨在序列拼接的交接点上，就可以了。

这是我帮你做的结果
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/primertool.cgi?ctg_time=1397236878&job_key=AhnqL9wldQFKLE4gLw58XjQjTk8nPFNK&CheckStatus=Check