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根据基因的什么设计引物
根据
某一
基因
mRNA序列
设计的引物
,可以用来从个体提取全基因组中DNA中扩...
答:
根据mRNA(真核的)设计的引物
,一般如果用DNA做模板的话,那么会出现的情况会是以下几种。一是能扩增出条带,但目标条带比你要的条带要大,因为你会连同内含子一同扩增出来,所以片段会偏大。二是什么都扩增不出来,这种情况一般是两种原因,1个是内含子片段太大,taq聚合酶没有延伸完,这种情况是...
引物是根据目的基因设计的
吗
答:
是。
引物是根据目的基因设计的
。在分子生物学实验中,引物是用于扩增目的基因的短片段DNA序列。引物的设计需要考虑多个因素,以确保其能够特异性地结合到目的基因上。引物的设计流程可以根据具体实验的需求和引物设计软件的使用情况而有所不同,设计引物的流程包括确定目的基因序列、选择引物设计软件、输入目的...
pcr引物设计
是
根据
原
基因的
编码链 还是模板链 有关系嘛
答:
引物设计
与编码链与模板链都没有关系,
根据
你讲的后期表达,说明需要表达出这种蛋白,那么你的PCR应该是以这段
基因的
mRNA为模板来
设计引物
,这样才是外显子所需要表达翻译的蛋白。生物都是基因转录mRNA为模板来翻译蛋白,同理,我们的蛋白表达也是mRNA为模板连接到载体翻译蛋白,这样就不会有问题。
克隆
基因
和
设计引物
有
什么
区别呀?
答:
做表达用的引物(比如实时荧光定量PCR)一般是根据基因的cDNA序列设计
,扩增的片段最好在80-150 bp范围,而且要求特异性要高,退火温度一般设置在60度左右,引物扩增效率要高;做克隆用的引物要求相对宽松,只要能够得到目的基因就可以了。
为
什么引物
只可以扩增特定DNA片段?
答:
因为那种引物是根据目的基因的特异序列设计的
,设计完还要去数据库里比对一下,没有错配的才能去用。能够错配到其它基因的都要重新设计。另一方面,从概率上说,普通引物20个碱基,错配几率是4的20次方。两条引物配对,错配几率很低了。
如何利用已知
基因设计
特异性
引物
?
答:
首先在NCBI进行blast比对,找到基因的
特异序列
,与其他基因同源性低的区域,然后再这些区域设计引物。还有一种方法是先在基因上设计引物,然后再blast比对引物,看看在你的目的物种中是否有同源基因。
...PCR时,目标
基因的
核苷酸序列是未知的,那我们
设计引物
是
根据
其...
答:
可以
根据
其其近缘种的保守
基因
序列
设计
,但通常都很难得到全长。要得到基因全长,可先得到中间片段序列,然后RACE或者Inverse PCR都可以尝试下。如果近缘种序列同源性很高,还可以参考其他物种序列,设计几对
引物
,直接扩增基因全长。
已知动物PRL
基因
序列如何
设计引物
已解决
答:
3,下游
引物设计
:将序列反相互补,得到互补链序列,选取5’-3’的
基因
序列约20bp左右,同样在5’端加上下游酶切位点和保护碱基;一般情况下还需要在酶切位点和基因之间加上stop codon.序列为:保护碱基(2bp)+下游酶切位点(6bp)+stop codon(3bp)+基因互补序列起始序列5’-3’,引物碱基总长约28...
引物设计
原则
答:
引物
设计引物
是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段目的
基因的
核苷酸序列,
根据
这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应...
基因
克隆的基本步骤有
哪些
答:
(2)PCR筛选和限制酶酶切法:提取转化子中的重组DNA分子作模板,
根据
目的
基因
已知的两端序列
设计
特异
引物
,
通过
PCR技术筛选阳性克隆。PCR法筛选出的阳性克隆,用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小。(3)核酸分子杂交法:制备目的基因特异的核酸探针,通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的...
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