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如何设计基因cds序列的pcr引物
如题所述
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推荐答案 2019-11-22
提取细胞总RNA然后用试剂盒反转录成cDNA,用cDNA作为模板扩增基因的CDS区,然后想要转染进细胞中。比如MYOD1基因,首先在NCBI找到它的mRNA序列,然后找到它的CDS序列,全部复制下来,在primer
5.0
中。正向
引物
直接从CDS的第一个核酸开始(比如18bp),反向引物从CDS最后一个核酸开始,向前选择序列(比如17bp),调节2个引物的长度(不一定要一致),尽量避免错配,
二聚体
,产生错的产物即可。最后在引物的5‘端添加酶切位点以及保护碱基。
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如何设计基因cds序列的pcr引物
答:
qRT-PCR的引物设计使用CDS,
最好扩增的片段能包含一个内含子剪切位点
,这样可以通过电泳排除扩增基因组DNA的可能性,让定量PCR更准确
[实用技巧]
构建基因过表达载体之设计引物
详细步骤
答:
确保酶切位点的适当距离,以便在载体上操作且酶活性不受影响(4.1)
。例如,XhoI和NotI的酶切位点分别为C TCGA G和GC GGCC GC,它们的完美结合将在示意图(图3.9)中清晰呈现。接下来,设计PCR引物至关重要。对于p53 CDS区的精确捕获,我们设计了上游引物ATGGAGGAGCCGCAGTCAG和下游引物TCAGTCTGAGT...
已经知道一段
基因的CDS
,我要扩全长,请问
怎么设计引物
答:
如果不考虑CG 、 二聚体话,直接在CDS的上下游设计匹配的
18-24bp的碱基作为引物即可PCR获得CDS
一个物种的
cds序列
可以用来
设计
荧光定量
PCR的引物
吗?求高手指点迷津啊...
答:
可以啊 只要是mRNA上的就可以了 一般扩增产物长度150-200最好
q
PCR引物设计
流程
答:
获取目标
基因的
CDS序列是成功
设计
q
PCR引物
的关键。CDS区域,即编码区,是转录产物mRNA的直接模板。在NCBI等数据库中搜索并下载
基因CDS序列
,确保引物能有效扩增mRNA,而非包含内含子的全长序列。使用如primer premier 6这样的专业软件,导入CDS序列,进行搜索和设计。软件会分析并推荐合适的引物,展示高级结构...
已经知道一段
基因的CDS
, 我要扩全长,请问
怎么设计引物
呢? 是不是在...
答:
不能随便截取。不考率二聚体可以,不考虑GC分布也可以,但是要考虑Tm值啊,Tm值不仅跟GC含量有关,还和
引物
长度有关,
设计的
一对引物要看Tm值是否相互接近,是否接近55℃。
2020-08-24质粒构建
答:
最后点击Edit->Copy->Sense Primer,粘贴到Word中即可得到正向引物,反向引物Copy之后粘贴也会自动变为5’到3’的
序列
。所以非常方便。 这样我们PDCD1用于
PCR的
正反向引物就初步
设计
好了。如果你只是想P出PDCD1这个
基因
,现在
的引物
就可以送去合成了,但是如果你想将其构建到载体上,那么我们还要对其进行进一步的加工。
大家正在搜
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