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免疫沉淀
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和GST pull down技术各有何优势
答:
都是用来研究蛋白质相互作用的技术
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的话蛋白质是处于天然状态,蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行,可以避免认为影响,还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体。但是问题是两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;而且必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择...
免疫沉淀
法和 western 印迹是一样的吗
答:
不一样~
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比western操作上复杂点,灵敏度也不一样。只能说原理都是抗原抗体特异性结合。网上随便搜搜都有很多资料的哇~
如何看
免疫沉淀
的结果图?
答:
图a中,每个基因都在3'末端添加了一个V5标签,正常表达后,其产物蛋白的C末端都会携带一段V5标签(9个或14个氨基酸,通常不影响蛋白功能),那么这样一来,只要用抗V5标签的抗体检测到了目标蛋白,那么就可以说明这个转入的基因表达了。图b中,左边是3个基因在成纤维细胞中的表达情况,左侧的数字为...
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样品如何保存
答:
保存的方法关键在于你要保存了以后做什么实验。通用的蛋白保存方法无外乎,添加50%的甘油,冻到-20C,或者是直接分装冻到-80C。还有一些对蛋白酶敏感的,可以添加蛋白酶抑制剂后再冻存。如果是要用来做质谱的,可能需要电泳,切胶以后4C保存胶块。如果要测酶活,可能还需要根据酶的特点添加一些保护稳定...
GST pull-down assay和
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的区别是什么?
答:
GST pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。
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一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。
我现在要做
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检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手...
答:
抽出来的蛋白去和柱子孵育,抗体识别的蛋白和与此蛋白互做的蛋白就挂到柱子上了 洗涤,将抗体不能结合的蛋白洗掉 洗脱,可以用蛋白电泳上样缓冲液将beads上的抗体,蛋白,蛋白结合蛋白一起洗下来 电泳 WB检测 之所以叫
免疫沉淀
,是因为利用了抗体的亲和力,所以叫免疫,而沉淀的意思就是指,抗体挂到...
GST pull-down assay和
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沉淀
的区别是什么?
答:
GST pull-down一般指用一个带GST标签的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。
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沉淀
一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。
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中IGG有什么用 详细解释 谢谢
答:
是抗体,用来与你感兴趣的蛋白结合,同时可以与包被有proteinA/G结合,形成一个复合物。在离心或磁场的作用下,包被有proteinA/G的小珠(如凝胶珠或磁珠)被分离出来,连带着你感兴趣蛋白被分离出来,如果你感兴趣的蛋白与其它蛋白有稳定的结合的话,也将被分离,通过鉴定这些连带被分离出来的蛋白,可以...
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组化后回收的一抗抗体出现混浊
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物是为什么,抗体还能用吗?_百 ...
答:
注射用抗体均是可溶性的
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球蛋白,混浊
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物很可能是由于外界物理变化(如储存温度、过度光照等)引起抗体变质、析出而形成的,一般不建议继续使用。
IP 和 CoIP有什么区别?
答:
简单的说IP就是用抗体把你要的蛋白
免疫沉淀
下来,然后去检测它。例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,这是可以用A蛋白的抗体+prorein A beads来IP,从细胞中把A拉下,再用特异的抗体(如磷酸化,泛素化抗体)来检测A的变化。而co-ip的原理是一样的,自是它检测的是和A...
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