第1个回答 2010-12-18
Oligo dt不需要设计，用试剂盒里面的就行。如果你RT的引物想用自己的，那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧。RT的时候'引物没太多的选择性，mRNA序列跟反义链配对，因此RT的引物要根据正义链 （就是通常描述基因序列的那条链）3'末端往5'末端的顺序来合成。需要注意通过控制引物的长度，控制Tm，毕竟反转录反应都在42℃进行的。
PCR用的引物建议使用primer primer等软件来设计。首先自己估算你目标条带的Tm值，然后在软件里面设定引物的Tm为目标的Tm附近，通常引物与模板配对区长度在20-25bp，扩增长度超过10k的话引物中与模板配对的要延长到30bp或更长，扩增长度、自由能、二聚体等要求就按照软件列出做填空就行了。最后，软件会给出一些引物对选择，你自己选择上下游引物Tm差值小的、二聚体和cross dimer以及false priming情况可以接受的那对引物组合。
空说太空泛了，需要的话跟我给我发消息，然后mail联系。本回答被提问者采纳