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怎样看rt-pcr设计的引物是否跨过内含子
如题所述
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推荐答案 推荐于2018-04-01
在NCBI查找序列的时候,gene部分会显示哪一段是外显子,哪一段是内含子;设计引物的时候使用的序列是mRNA或者CDS区间,哪一段是外显子也是可以确定的。把引物在序列上比对一下就可以了。
如需设计引物,可以添加为青生物公众号,由专业人员提供免费的定量PCR引物设计服务。
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一步法
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是跨
内含子
嘛
答:
一步法引物是跨内含子。
一步法引物包括两个引物,一个位于外显子的5'端,另一个位于内含子的3'端,从而使PCR扩增跨越内含子
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荧光定量
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为什么要跨
内含子设计
?
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荧光定量
PCR
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内含子
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设计
一个实验检验一个基因
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设计
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内含子
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如何设计
无
内含子
基因的realtime
pcr引物
答:
楼上的不懂不要装懂,胡说八道. 上下游
引物
各自应该落在两个外显子上,这样就是
跨过
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内含子
,可以避免基因组的干扰.
荧光定量
PCR引物
为什么要跨
内含子设计
答:
引物
若跨
内含子
的话,引物仅能以3'端的一小部分结合基因组DNA,这样的话Tm会很低。在较高的退火温度下,引物几乎无法和基因组DNA结合来引发聚合,而主要是与能够完全配对的cDNA结合并引发反应。
荧光定量
PCR的引物怎么设计
答:
1、查找该物种或近缘物种信息,
看是否
能确定内含子序列的位置,在CDS上
设计
跨
内含子的引物
,以避免基因组污染;2、扩增片段大小最好在200bp左右,太大会影响扩增效率;3、最好一次分别设计两条上游(距离较近)和下游引物(距离较近),组合成4个扩增片段;4、用任何方法或软件设计好的引用都要用少量...
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