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dna有rna污染影响rt-pcr实验么
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推荐答案 2016-03-28
首先，RNA不能用于
PCR扩增
的模板，因此有RNA污染的DNA不会影响扩增；其次，RT-PCR指的是从RNA反转录成DNA再进行扩增的过程，因此，不存在RNA污染DNA的说法，只有后者污染前者的说法。
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rna
苯酚
污染影响rt-pcr
结果吗
答：
影响
。因为rna被污染后，可能会掺杂一些非特异性的rna。然后导致引物可以靶向这些非特异性rna，从而导致实验结果有差异。
RT -PCR
的注意事项
答：
4．
PCR
不能进入平台期，出现平台效应与所扩增的目的基因的长度、序列、二级结构以及目标
DNA
起始的数量有关。故对于每一个目标序列出现平台效应的循环数，均应通过单独
实验
来确定。5． 防止DNA的
污染
：（1） 采用DNA酶处理
RNA
样品。（2） 在可能的情况下，将PCR引物置于基因的不同外显子，以消除基...
在real-time
PCR
中如何检测
DNA污染
答：
既然把DNA叫做污染，那应该是对
RNA
反转录后进行Real-time了。你用未进行反转录的RNA作为模板，跑一次检测Real-time。如果没有
DNA污染
，这次
RT
是不会得到扩增结果的，因为RNA不能作为普通Taq酶的模板；一旦RNA样品里面有DNA污染，那检测RT出现扩增产物的可能性非常高。只要RNA作为模板的Real-time
PCR
得到了...
分离mRNA过程中,如果
RNA
有
DNA污染
会
有影响
吗
答：
会有影响
。因为提取的RNA有DNA污染，那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染，这样，扩增cDNA。都会出现杂带或非特异性扩增，对实验结果不好。由一个DNA分子，边解旋，边转录。利用细胞核内部的游离核糖核苷酸合成。合成规则遵循碱基互补配对原则。以上过程叫做转录，在细胞核中完成。接着，mRNA穿过核孔。
为什么在做
RT-PCR
是要确保无
DNA污染
?
答：
1、若是基因组DNA的污染，可使用
DNa
seI处理
RNA
; 同时设置没有逆转录的对照组反应检测
DNA污染
。2、若是受到外源DNA的污染，可使用抗气雾剂和UDG酶。
反转录
PCR
注意事项
答：
PCR扩增过程中的平台效应是个关键问题，它受目的基因长度、序列、二级结构及初始DNA量等因素
影响
。针对每个目标序列，需要通过单独实验来确定最佳循环数，以避免平台效应对结果解读的干扰。最后，
DNA污染
是
PCR实验
中的另一个潜在威胁。为了防范，可以使用DNA酶处理
RNA
样本，确保RNA样本的纯度。同时，尽量选择不...
RT-PCR实验
操作的注意事项
答：
在做Northern等杂交
实验
、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得
RNA
病毒基因时,会用到RNA提取和
RT-PCR
技术。真核生物的基因组是
DNA
,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exo...
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