RT-PCR是什么

Question

如题所述

Answer 1

RT-PCR简介
RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。使用天为时代公司的总RNA提取系统（如目录号 DP405和DP406），所获得的RNA的纯度高，基因组DNA污染少，用于RT-PCR系统可得到满意结果。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA，三种都可。

参考资料：RT-PCR技术概述

Answer 2

随机引物PCR(arbitrarily
primed
PCR，AP-PCR)是指在对模板顺序一无所知的情况下，通过随意设计或选择一个非特异性引物，在PCR反应体系中，首先在不严格条件下使引物与模板DNA中许多序列通过错配而复性。在理论上，并不一定要求整个引物都与模板复性，而只要引物的一部分特别是3'端有3-4个以上碱基与模板互补复性，既可使引物延伸。
理论上，一旦在两条单链上相距一定距离且有反向复性引物存在，则可在Taq
DNA聚合酶的作用下进行DNA片段的扩增，经1至数轮不严格条件下的PCR循环后，再于严格条件下进行扩增。经DNA测序凝胶电泳分离后，即可得到DNA指纹图，通过对不同来源基因指纹图之间的比较，即可反映出待分析基因组的特征。
RNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息传递过程中的桥梁。tRNA的功能是携带符合要求的氨基酸，以mRNA为模板，合成蛋白质。
了解不？

Answer 3

Real Time PCR也叫RT-PCR～
定量PCR，用荧光定量，计算反应起始模板的浓度！

Answer 4

PCR是基因扩展检测技术，有很高的灵敏性，可对病毒基因检测，以检查标本是否有感受染

Answer 5

这个很简单，就是两步，一是RT，就是反转录，将提出来的RNA反转录成cDNA，二是PCR，就是以第一步反转录得到的CDNA为模板，做PCR扩增