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慢病毒稳定
慢病毒
的特征比较
答:
其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。 病毒表达系统 腺病毒表达系统
慢病毒
表达系统 逆转录病毒 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 RNA病毒 是否整合 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、
稳定
表达外源基因 ...
慢病毒
载体认识
答:
慢病毒
载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体,慢病毒载体包含了包装、转染、
稳定
整合所需要的遗传信息,是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织...
采用
慢病毒
载体构建shRNA载体有什么优势?
答:
1.
慢病毒
可以转染难转染的细胞,可转染的细胞种类多 2.慢病毒载体所携带的目的基因可以整合入细胞基因组,
稳定
长期表达。这样,shRNA可以长时间的KNOCK DOWN目的基因 3.目前所用的慢病毒安全性很高,满病毒包装系统的安全性也很高 4.此技术已经较为成熟 ...
慢病毒
的应用
答:
慢病毒
也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA半衰期短,体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体,然后转移到细胞内转录siRNA的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,...
慢病毒
成品质粒残留
答:
由于瞬时转染中过量的质粒和转染试剂的残留,会引起终产物的污染。因此,
稳定
的
慢病毒
载体生产细胞株运行而生。慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
病毒包装的
慢病毒
答:
5、目前比较广泛采用的第三代包装系统——四质粒系统只含有HIV-1共9个基因中的3个,即gag、pol、rev。由于HIV-1基因组成分中60 %被去除,因此父代病毒无法复制,是目前重组系数最低的一个
慢病毒
包装系统,至今未见重组报道。其更安全、更
稳定
、更高效的技术优势领先于市场上的三质粒及其他包装系统。...
如何生产高滴度的
慢病毒
答:
效率,还要看细胞毒性。事实上,状态好代数低的293T细胞都很容易转 染,因此,在
慢病毒
包装的转染实验中,我们应该更多地去关注细胞毒性 问题。正因如此,有不少方案推荐使用磷酸钙转染法。但磷酸钙转染法操 作繁琐,对 pH 的要求甚高,转染效率
稳定
性差。3.插入基因片段的大小 慢病毒载体容纳外源基因...
细胞
慢病毒
感染:注意要点
答:
1.确定合适的MOI值 过高的MOI会对细胞毒性太大。建议降低MOI值或者重新确定最佳MOI值。过低的MOI值直接影响
病毒
的感染效率。2.细胞状态 感染前确保细胞状态良好,若细胞感染前状态较差,感染后容易出现死亡。3.感染时间 病毒感染的时间建议不能过短,病毒感染的时间太短,病毒没有侵入到细胞内部。如果感染...
什么是
慢病毒
包装
答:
慢病毒
载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。慢病毒载体介导的基因表达、RNAi或基因敲除作用持续且
稳定
,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒...
慢病毒
载体的概念
答:
(H IV-1) 来源的一种病毒载体,
慢病毒
载体包含了包装、转染、
稳定
整合所需要的遗传信息,是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织中表达。
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