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慢病毒稳定
慢病毒
和腺病毒的区别?
答:
1.转染效率:
慢病毒
较高 2.慢病毒可以实现
稳定
转染,腺病毒是瞬时转染 3.包装量:慢病毒可以包装4kb左右,不超过8kb的外源基因,腺病毒可以包装8kb左右外源基因 4.慢病毒操作较方便,周期也短。但腺病毒表达快,1-2天,慢病毒要2-4天。5.安全性:两个差不多 6.感染细胞类型:都可以感染分裂和...
如何利用好
慢病毒
感染的原理和特点?
答:
2) 可以通过简单方式,在短时间内获得
稳定
表达特定基因的多种细胞株。3) 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。4) 无需任何转染试剂,操作简便。5) 可以根据客户需要制备多种标记。三、
慢病毒
包装简要流程:1) 含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。2) 慢病毒载体,包...
如何利用
慢病毒
载体构建
稳定
表达外源基因的细胞系不
答:
1.将外源基因插入
慢病毒
载体 2.将构建完成的载体与慢病毒包装质粒混合,共转染靶细胞 3.收集病毒液 4.用病毒液感染靶细胞 5.用载体上带的抗生素进行筛选,如果没有,可以用无限稀释法 6.获得稳转株
什么是
慢病毒
、腺病毒及腺相关病毒,他们在科研领域的主要应用和特点分别...
答:
慢病毒
:① 可以
稳定
整合至宿主基因组,整合位点随机;② 可以对分裂期及非分裂期细胞进行感染;③ 包装片段至多8 kb,浓缩滴度至多为108-109TU/mL,片段越大,滴度越低;④ 可以应用Tet-on等诱导表达系统,表达水平较高;腺病毒:① 不能整合至宿主基因组,仅能瞬时表达;② 可以对分裂期...
已有质粒怎么
慢病毒
包装构建
稳定
细胞株
答:
已有质粒怎么
慢病毒
包装构建
稳定
细胞株 一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定....
什么是
慢病毒
答:
慢病毒
(Lentivirus,LV)是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,属于逆转录病毒,区别一般的逆转录病毒载体,具有感染谱广泛的特点,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。感染能力强,且免疫原性低,可有效感染神经...
慢病毒
的应用
答:
慢病毒
也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA半衰期短,体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体,然后转移到细胞内转录siRNA的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,...
采用
慢病毒
载体构建shRNA载体有什么优势?
答:
1.
慢病毒
可以转染难转染的细胞,可转染的细胞种类多 2.慢病毒载体所携带的目的基因可以整合入细胞基因组,
稳定
长期表达。这样,shRNA可以长时间的KNOCK DOWN目的基因 3.目前所用的慢病毒安全性很高,满病毒包装系统的安全性也很高 4.此技术已经较为成熟 ...
慢病毒
载体认识
答:
慢病毒
载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体,慢病毒载体包含了包装、转染、
稳定
整合所需要的遗传信息,是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织...
慢病毒
的特征比较
答:
其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。 病毒表达系统 腺病毒表达系统
慢病毒
表达系统 逆转录病毒 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 RNA病毒 是否整合 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、
稳定
表达外源基因 ...
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