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UTR引物
定量pcr
引物
可不可以设计在
utr
区域
答:
可以的。
UTR
区通常具有高度特异性,可以作为定量扩增的备选区。
...在对目的基因PCR时,为什么一些人设计的上游
引物
不是从ATG开始的,而 ...
答:
克隆基因的编码框时,必须从ATG开始或
UTR
处开始。当你想表达这个基因时,PCR产物必须包括完整的读码框;当你需要该基因融合GFP时,不仅需要从ATG开始,终止密码子必须突变掉,而且目的基因与GFP必须在一个读码框中。而需要监测目的基因的表达水平时,如果使用RT-PCR,则最好是从基因的中上段开始设计
引物
...
如何通过已知的目的蛋白肽段序列设计
引物
来获取目的基因
答:
我有时会先设计一对
引物
,这对引物分别在5'和3'
UTR
区域,用软件设计,要保证引物好用;这样以cDNA为模板进行扩增后,再以此产物为模板用ATG到TGA的一对引物去扩增,这样就较大程度避免了错配,比较容易扩增成功。
常常说的
引物
的5端,3端,那么这个某一端是指这一端的第一个核苷酸呢,还...
答:
5端3端不是指1个或几个碱基,而是指一个方向,例如5'
UTR
,就是指位于5端的非翻译区,如果是指几个碱基,那5'UTR这几个词放在一起不就冲突了吗
LncRNA 过表达慢病毒载体
引物
设计
答:
原则上是将全长lncRNA 定向克隆到表达载体上实现 lncRNA 的过表达。然而有些 lncRNA很大或全长尚未分离,这时将视 lncRNA 在基因组上的定位采取不同的研究策略。在构建 lncRNA 表达质粒时,需关注 lncRNA 是否在蛋白编码基因的启动子区域或 3 ′-
UTR
区域 ,勿遗漏重要区段。
引物
设计是...
...我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的
引物
无法扩增出目的片段...
答:
就是从两侧的
UTR
区开始设计。但是我不敢保证啊。所以我建议您先在UTR区设计
引物
,扩出来长片段后再扩增您的目的片段。这样会容易点。P.S.保护碱基的作用是可以使PCR产物两端的酶切位点被识别,从而可以直接酶切PCR产物使其产生粘性末端,以便进行后续的克隆。这和PCR能否扩增出来没有任何关系。
反转录的产物中是否有
utr
区域
答:
这要看你怎么反转路了。合成第一链时,一般方法使用odt会带着比较完整的
utr
,如果是用的n6或n9,就不一定了。如果是特点
引物
扩增,由引物决定。
谁知道启动子的
引物
怎么设计,要求具体,越详细越好,而且是能实际操作的...
答:
这个一般要多试几次的,Forward的话从5‘
UTR
上游3000(一般的就够了)开始每隔500设置一个,Reverse的话设置在5‘UTR附近,可以进入mRNA。PCR之后转入带标记的载体看看Maker表不表达,表达的就是OK的,取长度最小值就可以。另外,可以去一些网站看看,他们都可以做些预测,这样可以少走些弯路。
已知序列的ORF(有内含子)和3'
UTR
,做实时荧光定量PCR从哪里设计
引物
可以...
答:
上下游
引物
位于内含子两端的外显子上
想知道表达质粒转染细胞后的mRNA水平,怎么设
引物
将质粒产生的mRNA和细...
答:
质粒表达的mRNA是没有3'
UTR
和5'UTR的,你可以在这两处和CDS上设计一个,然后相减,就是质粒表达的mRNA。
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