DNA模板有RNA污染，做实时PCR有影响么？

Question

基因组DNA纯度1.9~2.0，是RNA污染么？这样的模板做实时PCR有影响么？该怎样解决？谢谢大家

Answer 1

是做拷贝数检测吗?

DNA纯度1.9~2.0,实际还算正常咯,建议你跑个电泳 看一下 有没有降解及大坨的RNA.如果没有降解的话，做模版应该没问题；如果确实有很多RNA（我估计不太可能），也没关系，RNA很易降解的，你将样品在四度放几天说不定RNA就没了，实在不行的话，你加点DNase- free RNase 37度处理30min，酚/氯仿抽提，然后无水酒精沉淀，ok

Answer 2

你这个纯度指的是260nm/280nm吗？这个不能区分DNA和RNA的
你是怎么纯化的的DNA，有些方法得到的260/280会在2左右
还有就是你做的PCR是什么PCR？你的引物cover的范围在什么地方？如果不在exton或者有进入intron和non coding seq的地方就无所谓了
而且还要看你的RNA来自何处，如果是同一批细胞或者组织的RNA，有也无所谓啊（我想不出做PCR有什么是必须只能amplify DNA而不能从RNA来的），如果是外源的才会有问题。
一般我们不担心RNA污染DNA的问题，因为RNA更加脆弱，RNase又几乎无所不在
如果你非常担心这个问题的话，以后纯化DNA的时候用DNase free RNase处理一下就不会有问题了本回答被提问者采纳

Answer 3

没事。难道你要用DNA做表达么？
如果有内含子的话，长的是DNA片段，没有内含子的话，那就没所谓了

Answer 4

一般的PCR没事的，直接做就好了！

Answer 5

首先确认下，你是用基因组做模板上Q-PCR做表达的吗？？？ 是做探针的还是荧光染料SYBR Green Ⅰ？