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动物组织rna降解会影响后续的rt-pcr吗
如题所述
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推荐答案 2016-08-17
当然会,rt-PCR如果是逆转录的话就是以RNA为模板,如果降解了肯定会影响的
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RNA
发生
降解
是否
影响PCR
的真实性?
答:
1.8~2.2是正常的,2.5太高了。有条带说明还没有全部被
降解
,但是用于定量已经完全不可靠了。
在提取海参管足,体壁等
组织的RNA
时,RNA结果通常有颜色
答:
我估计你是用Trizol法沉淀
RNA
吧,容易有一些杂质的。部分色素是会和RNA一起沉下来。这种情况可以用75%冷的乙醇多洗几遍。对
后续
q
RT-PCR
多数情况下没什么
影响
。另外可以用硅胶柱法纯化RNA,色素残留会少一些。以上是我的经验。
我做的是
RT-PCR
提取的是
动物
细胞,DNA电泳胶上没有条带的可能原因有哪些...
答:
原因很多,可能是提取过程中,
RNA降解
了,也可能是你的反转录不成功,扩不出来;也有可能是你的循环数太少了
已经经过较长时间保存的
组织
蜡块能否用来做
RT-PCR
?
答:
可以试一下,不过蜡块保存时间过长的话,RNA降解严重,本身RNA就比较容易降解。
但是假如RNA的分子量比较小的话,还是有可能的
。另外选用一些质量好的RNA提取试剂盒。
组织
与细胞
rt-pcr
步骤有区别吗
答:
另外,
组织RNA
比较容易降解,RT-PCR结果不好,可能跟RNA提取的浓度及纯度有很大关系。建议先将新鲜组织经液氮冻存后再提取,提组织RNA的东西比如研钵,镊子等都要200度干烤2小时去除RNA酶。你
的RT-PCR
结果不好,有可能是你提取的组织RNA不纯,或者
RNA降解
了。
我做
的RT-PCR
,提取的是
动物
细胞,DNA电泳有痕迹却没有条带,可能的原因有...
答:
比如cDNA
降解
或者
RNA的
杂质较多,这两种原因更多一些,如果是cDNA降解那么你扩增成熟的内参引物效果也会不好。如果是RNA杂质很多可能
会影响
到反转录和
后续的PCR
扩增,那么你最好重新提取RNA,建议使用RNAprep试剂盒(TIANGEN)可以非常容易的提取高纯度的完整RNA,去除基因组的效果也很好。一般
动物
细胞提取RNA很...
RT -PCR
的注意事项
答:
其目的在于避免
RNA
定量误差、加样误差以及各
PCR
反应体系中扩增效率不均一各孔间的温度差等所造成的误差。4. PCR不能进入平台期,出现平台效应与所扩增的目的基因的长度、序列、二级结构以及目标DNA起始的数量有关。故对于每一个目标序列出现平台效应的循环数,均应通过单独实验来确定。5. 防止DNA的污染...
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