食品中链球菌检测方法？

Question

如题所述

Answer 1

MM_FS_CNJ_0352出口食品 B群链球菌 CAMP试验法

MM_FS_CNJ_0352

出口食品中B群链球菌检验方法

1.适用范围

本方法适用于出口肉类、奶和奶制口中B群链球菌的检验。其他食品可参照使用。

2.主要试剂和仪器

2.1.主要试剂(包括培养基)

Todd,Hewitt肉汤〔参见附录A(补充件)A1〕;

牛心汤培养基〔参见附录A(补充件)A2〕;

牛心汤增菌培养基〔参见附录A(补充件)A3〕;选择性

牛心汤琼脂〔参见附录A(补充件)A4〕;

绵羊血琼脂平板〔参见附录A(补充件)A5〕;

β-溶血素带〔参见附录A(补充件)A6〕;

溶血素带〔参见附录A(补充件)A7〕; β-

绵羊血球〔参见附录A(补充件)A8〕;

生理盐水:灭菌的0.85,NaCl;

(补充件)A9〕; 革兰氏染色液〔参见附录A

接触酶(过氧化氢酶)试验〔参见附录B(补充件)〕。

2.2.仪器

离心机5000r,min，离心管50mL，10mL;

蔡氏滤器;

微孔滤膜，孔径0.45μm;

玻璃抽滤瓶;

玻璃水循环真空泵;

电热恒温箱;温度20,60?;

显微镜;

定性滤纸;

不锈钢厌氧菌培养罐;

电冰箱;

乳钵、研棒或均质器;

L形玻璃棒;

金黄色葡萄球菌菌体ATCC,25923。

3.样品的制备

3.1.肉类

3.1.1.冷冻产品应在2,5?过夜解冻，或在45?及以下经15min解冻，立即检验。若不能及时检验，应置于,15?左右暂存。其他非冷冻易腐的食品，亦应置于4?冰箱保存。

3.1.2.以无菌操作称取剪碎的肉类样品25g，置于灭菌之乳钵内或均质杯内，加入25mL灭菌生理盐水进行研磨或均质(8000,10000r,min，均质1min)，移

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入盛200mL生理盐水的5000mL广口瓶内，混合均匀，制成1?10稀释液。

3.2.奶和奶制品类

3.2.1.鲜奶、酸奶:以无菌手续去掉瓶罩纸盖，瓶口经火焰灭菌后，用无菌操作吸取25mL检样，放入装有225mL灭菌生理盐水的三角烧瓶内，振摇均匀。

3.2.2.奶粉:以无菌手续开封取样，称取25g放入盛有225mL温热的灭菌生理盐水且装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶内，振摇使其充分溶解混匀。

3.2.3.奶酪:先用灭菌刀削去部分表面封蜡，然后用点燃的酒精棉球灭菌表面后，用灭菌刀切开奶酪，再用无菌操作切取表层和深层检样25g，置于灭菌乳钵内切碎，加入25mL生理盐水研成糊状，移入盛有200mL灭菌生理盐

水的广口瓶内，混合均匀。制成1?10的稀释液。

3.3.其他食品

样品的制备取决于食品的种类和状态。固体或半固体食品按3.1.2或3.2.3进行。液体食品按4.2.1进行。

4.过程简述

.1.增菌培养 4

将上述制备的检样各取10mL分别接种于100mL牛心汤培养基内，如检样污染较严重，可同时按上述量接种于选择性牛心汤增菌液内，经35?1?培养15h，

-带或CAMP-点试验。 再进行CAMP

4.2.CAMP试验的条件

?1?培将CAMP试验的绵羊血琼脂平板置于不锈钢厌氧菌培养罐内，在35养。

4.3.CAMP-带试验

取β-溶血素带1,2条平行轻贴于绵羊血琼脂平板上，间距20mm，将样品或经过增菌的培养物直接在β-溶血素带两侧(相距3,5mm)处垂直划线3,4条或涂布接种，经14,18h培养后观察结果。如在接种线与β-溶血素带周围朦胧溶血区重叠处能见到协同产生清晰的“箭头”状的增强溶血区为阳性反应，可鉴定为B群链球菌。不见增强溶血为阴性反应，判为B群链球菌阴性。

4.4.CAMP-点试验

将样品或经过增菌的培养物直接划线或用L形玻璃棒涂布接种于绵羊血琼脂平板上，经14,18h培养后，用接种环取β-溶血素滴加在圆形突起，细小的可疑为链球菌的单个菌落边缘，再将平板进行孵育，分别在30，45，60min检查溶血变化情况。在滴加β-溶血素的菌落边缘有协同产生“扇形”增强溶血区的为阳性反应，可鉴定为B群链球菌。不出现增强溶血现象的为阴性反应，判为非B群链球菌。

每次检验时都要用已知阳性菌株作为对照试验。 4.5.CAMP-带或CAMP-点试验阳性反应，再进行革兰氏染色，镜检和接触酶试验，以此来与其他溶血性细菌如李斯特氏菌，肉毒梭状芽胞杆菌和葡萄球菌等区别开。

Answer 2

食品微生物检测是运用微生物学的理论与方法，检验食品中微生物的种类、数量、性质及其对人的健康的影响，以判别食品是否符合质量标准的检测方法。

简介
食品微生物检验方法是食品质量管理必不可少的重要组成部分，它是贯彻“预防为主”的方针，可以有效地防止或者减少食物人畜共患病的发生，保障人民的身体健康。食品微生物检验是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品是否食用的科学依据之一。通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生情况，能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据。

范围
①生产环境的检验：车间用水、空气、地面、墙壁等。

②原辅料检验：包括食用动物、谷物、添加剂等一切原辅材料。

③食品加工、储藏、销售诸环节的检验：包括食品从业人员的卫生状况检验、加工工具、运输车辆、包装材料的检验等。

④食品的检验：对出厂食品、可疑食品及食物中毒食品的检验。

范围
国内外开展微生物检验的食品种类较多，食品分类方法也不尽相同。总的来看涉及微生物检验的食品种类主要有：奶制品、预烹煮食品、饮用水、蛋制品、水果、谷物、婴幼儿食品、肉及肉制品、软体动物、禽肉、贝类、白明胶、香草（药）、即食食品、罐头食品、调味品，粉类制品、豆制品、冷冻饮品、糖果、海鲜、甜点、蔬菜、藻类、食疗食品、米面制品等。

我国开展微生物检验的重点食品种类为：奶制品、罐头食品、调味品、蛋制品、淀粉类制品、发酵和非发酵性豆制品、冷冻饮品、糖果、饮用天然矿泉水等，其中食糖以及保健品的微生物检验为我国所独有。

指标
目前，我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌3项。

菌落总数

菌落总数是指食品检样在严格规定的条件下（样品处理、培养基及其pH值、培养温度与时间、计数方法等）培养后，单位重量(g)、容积(mL)或表面积(cm2)上，所生成的细菌菌落总数。

菌落总数

大肠菌群

肠杆菌科的埃希氏菌属，柠檬酸杆菌属，肠杆菌属和克雷伯菌属统称为大肠菌群 。它们均来自人或温血动物肠道，不形成芽孢，在35－37℃条件下发酵乳糖产酸产气的革兰氏阴性杆菌。这些细菌是寄居于人及温血动物肠道内的常居菌，它随着大便排出体外。食品中如果大肠菌群数越多，说明食品受粪便污染的程度越大。故以大肠菌群作为粪便污染食品的卫生指标来评价食品的质量，具有广泛的意义。

大肠菌群

致病菌

致病菌即能够引起人们发病的细菌。大肠菌群检验呈阳性，并怀疑食品可能受到致病菌污染时可进行致病菌检验。在我国现有的国家标准中，致病菌一般指“肠道致病菌和致病性球菌”，主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、致病性链球菌等四种，致病菌不允许在食品中检出。

对不同的食品和不同的场合，应选择一定的参考菌群进行检验。如海产品以副溶血性弧菌作为参考菌群，蛋与蛋制品以沙门氏菌菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌等作为参考菌群，米、面类食品以蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、霉菌等作为参考菌群，罐头食品以耐热性芽孢菌作为参考菌群等。

霉菌及其毒素

我国还没有制定出霉菌的具体指标，鉴于有很多霉菌能够产生毒素，引起食物中毒及其他疾病，故应该对产毒霉菌进行检验。如曲霉属的黄曲霉、寄生曲霉等，青霉属的橘青霉、岛青霉等，镰刀霉属的串珠镰刀霉、禾谷镰刀霉等。

霉菌

其他指标

微生物指标还应包括病毒，如肝炎病毒、猪瘟病毒、鸡新城疫病毒、马芷克氏病毒、口蹄疫病毒、狂犬病病毒，猪水泡病毒等；另外，从食品检验的角度考虑，寄生虫也被很多学者列为微生物检验的指标，如旋毛虫、囊尾蚴、猪肉孢子虫、蛔虫、肺吸虫、弓形体、螨、姜片吸虫、中华分枝睾吸虫等。

美国开展的食品微生物检验项目主要包括：需氧菌平板计数、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌、凝固酶阳性葡萄球菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、创伤弧菌、肉毒梭菌、麻痹性贝类毒素、神经性贝类毒素、遗忘性贝类毒素以及组胺等。

程序
（1）采集样品

采样前要了解所采样品的来源、加工、储藏、包装、运输等情况，采样时必须做到：使用的器械和容器需经灭菌，严格进行无菌操作；不得加防腐剂；液体样品应搅拌均匀后才去采样，固体样品应在不同部位采取以使样品具代表性；取样后及时送检。

国际食品微生物标准委员会(ICMSF)制定的食品微生物学分析采样方法，目前已在国内外被逐步推广采用。ICMSF根据以下原则来规定不同的采样数：①各种微生物本身对人的危害程度各有不同；②食品经不同条件处理后，其危害程度可分为3种情况：危害度降低；危害度未变；危害度增加。依据ICMSF采样方法规定，其中：n：指一批产品采样个数；c：指该批产品中检样菌数超过限量的检样数；m：指合格菌数限量；M：指附加条件后判定为合格的菌数限量。

（2）样品送检

采集好的样品应及时送到食品微生物检验室，一般不应超过3h，如果路程较远，可将不需冷冻的样品保持在1～5℃的环境中，勿使冻结，以免细菌遭受破坏。

样品送检时，必须认真填写申请单，以供检验人员参考。

检验人员接到送检单后，应立即登记，填写序号，并按检验要求，立即将样品放在冰箱或冰盒中，并积极准备条件进行检验。

（3）样品处理

样品处理应在无菌室内进行，若是冷冻样品必须事先在原容器中解冻，解冻温度为2～5℃不超过18h或45℃不超过15min。

a.固体样品

用无菌刀、剪或镊子称取不同部位的样品，剪碎放入灭菌容器内，加一定量的水混匀，制成1: 10混悬液，进行检验。在处理蛋制品时，加入约30个玻璃球，以便震荡均匀。生肉及内脏，先进行表面消毒，再剪去表面样品，采集深层样品。

b.液体样品

原包装样品用点燃的酒精棉球消毒瓶口，再用经石炭酸或来苏儿消毒液消过毒的纱布将瓶口盖住，用经火焰消毒的开关器开启。摇匀后用无菌吸管吸取；含有二氧化碳的液体食品，按上述方法开启瓶盖后，将样品倒入无菌磨口瓶中，盖上消毒纱布，将盖开一小缝，轻轻摇动，使气体逸出后进行检验；将冷冻食品放入无菌容器内，融化后检验。

c.罐头

罐头
罐头进行密闭试验、膨胀试验和检验。将被检验罐头置于85℃以上的水浴中，使罐头沉入水面以下5 cm，观察5 min，如有小气泡连续上升，表面漏气；另外将罐头放在(37±2)℃环境下7d，如是水果、蔬菜罐头，放在20～25℃环境下7d，观察其盖和底有无膨胀现象。检验时，先用酒精棉球擦去罐上油污，然后用点燃的酒精棉球消毒开口的一端，用来苏儿消毒纱布盖上，再用灭菌的开罐器打开罐头，除去表层，用灭菌匙或吸管取出中间部分的样品进行检验。

（4）检验

每种指标都有一种或几种检验方法，可根据不同的食品、不同目的来选择恰当的检验方法。通常所用的常规检验方法为现行国家标准，或国际标准，（如FAO标准、WHO标准等），或食品进口国的标准（如美国FDA标准、日本厚生省标准、欧共体标准等）。

食品卫生微生物检验室接到检验申请单，应立即登记，填写试验序号，并按检验要求立即将样品放在冰箱或冰盒中，积极准备条件进行检验。

一般阳性样品发出后3d（特殊情况可适当延长）方能处理样品；进口食品的阳性样品，需保存6个月方能处理。阴性样品可及时处理。

（5）结果报告

样品检验完毕后，检验人员应及时填写报告单，签名后送主管人核实签字，加盖单位印章，以示生效，并立即交给食品卫生监督人员处理。

Answer 3

1、范围
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于各类食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验，
2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单〔不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准．GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3、设备和材料
3.1冰箱：O℃——4℃。
3.2恒温培养箱：36℃士1℃。
3.3恒温水浴锅：36℃土1℃。
3.4显微镜：10*～l00*。
3.5均质器或灭菌乳钵。
3.6离心机：4000r/min。
3.7架盘药物天平：0g——5009，精确至0.5g。
3.8灭菌试管：10mm*100mm、l6mm*160mm。
3.9灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。
3.10灭菌锥形瓶：100mL。
3.11灭菌培养皿：直径90mm。
3.12灭菌棉签、镊子等。
4、培养基和试剂
4.1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。在肉浸液肉汤内加人1％葡萄糖。
4.2肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。
4.3匹克氏肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.62规定。
4.4血琼脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6规定。
4.5人血浆。4.6 0.25%氯化钙。
4.7 0.85％灭菌生理盐水。
4.8杆菌肤药敏纸片（含0.04单位）。
5、操作步骤
5.1样品处理按无菌操作称取食品检样25g（ml)，加人225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
5.2培养将上述混悬液吸取5ml，接种于50ml工葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种于血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36℃ 土l℃ 培养24h接种血平板，置36℃ 士1℃ 培养24h,挑起乙型血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肤敏感试验。
5.3形态与染色本菌里球形或卵圆形，直径0.5um ——1um链排列，链长短不一，颊者4个～8个细胞组成，长者20个一30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽抱，无鞭毛，不能运动。
5.4培养特性该菌营养要求较高，在普通培养纂上生长不良，在加有血液、血清培养荃中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm～0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2mm—4mm。界限分明、无色透明的溶血圈。
5.5链激酶试验致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加人18h～24卜、36℃ 士1℃ 培的链球菌培养物0.5 m及0.25％氯化钙0.25ml（如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%——0.35 %)振荡摇匀，置于36℃ 士1℃ 水中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动），然后观察凝固块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。
草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放人灭菌小试管中，再加人5ml血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。
5.6杆菌肚敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布子血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有。．04单位的杆菌肤纸片，放于上述平板上，于36℃ 士1℃ 培养18h—24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用已知阳性菌株作为对照。

Answer 4

孕晚期，产妇为什么现在都查B族链球菌？

小红姐产房故事
我的知乎 2019
产房资深助产士，为你讲述产房里面有趣的事儿
孕晚期，产妇为什么现在都查B族链球菌？
来自专栏小红姐产房故事
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2 分钟
妇产医学的进步，在这些年是日新月异。作为在产房工作20多年的助产士来说，我更是深有体会。

就拿现在的产前筛查项目来说吧，就有了不少的变化。

前几天，一位十年前生第一胎的孕妈，在我们医院生二胎，就发现在产前检查中，有一项新的检查项目， B族链球菌筛查。孕妇就感到不理解，觉得这些检查是不是过度医疗呢，或者是单纯为了收费而增加的？

小红姐先科普一下什么是B族链球菌。这种菌是B型一种常见的肠内菌，大约10-35%健康女性的直肠肛门或阴道里面，都可以发现B族链球菌的踪迹，通常B族链球菌并不会危害健康，但偶尔也会导致严重的健康问题，其中60%以上的感染会发生在顺产的新生儿身上。

对新生儿而言，感染B族链球菌是败血症和脑膜炎最常见的病因，也是新生儿肺炎的常见病因，感染了B族链球菌脑膜炎的新生儿即使治愈以后，也容易留下一些后遗症，比如，听力或视力受损、学习障碍、运动障碍或是脑性麻痹等等，

小宝宝之所以感染，是因为顺产时要经过妈妈的产道，如果妈妈的产道中存在这种链球菌，就容易被感染。B族链球菌感染还容易引起早产、流产或胎膜早破甚至死亡。为了避免这些问题出现，孕妈最好在孕35-37周的时候进行B族链球菌的例行检查，至少可以减少70%以上的感染，确保新生儿健康。

据统计，孕妈如果感染B族链球菌，其中40-70%在分娩过程中会传染给新生儿，如果新生儿带了这种菌，大约有1%-3%会出现早期的侵入性感染，其中有些严重的会导致死亡。

基于B族链球菌感染引起的孕妇和新生儿相关症状、疾病的严峻性，产前筛查就显得尤为重要。欧美国家已经把这种产前筛查作为必查的项目。

这种产前筛查也很简单，孕妈在孕35－37周时，进行阴道及肛门B族链球菌的例行筛查。无创也无痛，没有什么不适感。

如果在筛查中，发现带菌怎么办？孕妈也不要着急，临床上给予抗生素治疗可以减少大多数新生儿的早发性感染。

在这里，小红姐还要多说一句，有些人把b族链球菌感染和不洁的生活方式联系在一起，是没有根据的。任何女性的体内都有可能存在b族链球菌。

在过去，由于缺乏对于孕期B族链球菌带菌率，新生儿感染率的相关研究，且试验方法及诊断标准不统一，并存在区域差异。因此，并没有将B族链球菌筛查作为一个产前的必查项目，各医疗机构根据实际情况决定是否开展，不是常规。但随着和国际接轨和认识的提高，目前，在我们医院，这项产前筛查已经成为了必检的项目。

还有一些孕妇问：小红姐，如果我在孕期没有经过这项检查，紧急到院临产怎么办？

有这种情况不用着急，产妇在顺产前，可以进行紧急的检查，一般2小时内就可以出结果，在临产前给予足量的抗生素，常用青霉素注射，就可以有效的避免新生儿感染，这些用药，对胎儿也是安全的。

Answer 5

食品中链球菌检测方法？

1、范围
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于各类食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验，
2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单〔不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准．GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3、设备和材料
3.1冰箱：O℃——4℃。
3.2恒温培养箱：36℃士1℃。
3.3恒温水浴锅：36℃土1℃。
3.4显微镜：10*～l00*。
3.5均质器或灭菌乳钵。
3.6离心机：4000r/min。
3.7架盘药物天平：0g——5009，精确至0.5g。
3.8灭菌试管：10mm*100mm、l6mm*160mm。
3.9灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、5mL、10mL（具0.1mL刻度）。
3.10灭菌锥形瓶：100mL。
3.11灭菌培养皿：直径90mm。
3.12灭菌棉签、镊子等。
4、培养基和试剂
4.1葡萄糖肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。在肉浸液肉汤内加人1％葡萄糖。
4.2肉浸液肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.1规定。
4.3匹克氏肉汤：按GB/T4789.28一2003中4.62规定。
4.4血琼脂平板：按GB/T4789.28一2003中4.6规定。
4.5人血浆。4.6 0.25%氯化钙。
4.7 0.85％灭菌生理盐水。
4.8杆菌肤药敏纸片（含0.04单位）。
5、操作步骤
5.1样品处理按无菌操作称取食品检样25g（ml)，加人225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
5.2培养将上述混悬液吸取5ml，接种于50ml工葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种于血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36℃ 土l℃ 培养24h接种血平板，置36℃ 士1℃ 培养24h,挑起乙型血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肤敏感试验。
5.3形态与染色本菌里球形或卵圆形，直径0.5um ——1um链排列，链长短不一，颊者4个～8个细胞组成，长者20个一30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽抱，无鞭毛，不能运动。
5.4培养特性该菌营养要求较高，在普通培养纂上生长不良，在加有血液、血清培养荃中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm～0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2mm—4mm。界限分明、无色透明的溶血圈。
5.5链激酶试验致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加人18h～24卜、36℃ 士1℃ 培的链球菌培养物0.5 m及0.25％氯化钙0.25ml（如氯化钙已潮解，可适当加大至0.3%——0.35 %)振荡摇匀，置于36℃ 士1℃ 水中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动），然后观察凝固块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。
草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01g放人灭菌小试管中，再加人5ml血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。
5.6杆菌肚敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布子血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有。．04单位的杆菌肤纸片，放于上述平板上，于36℃ 士1℃ 培养18h—24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用已知阳性菌株作为对照。