包涵体变复性包涵体复性

Question

如题所述

Answer 1

由于重组蛋白在包涵体中通常丧失生物学活性，且处理条件可能导致其高级结构受损，复性过程对恢复其正常结构至关重要。复性通常通过逐步降低变性剂浓度，如在4M尿素中开始，2M以下结束，盐酸胍则从4M逐渐降至1.5M。复性方法有多种，如稀释复性（一次性、分段或连续）、透析、超滤和色谱柱复性（如疏水柱和凝胶柱）等。其中，色谱柱复性由于高回收率、快速和可放大性，越来越受到重视，适合大规模生产。

高浓度复性可通过连续或分阶段加入缓冲液，或通过温度跳跃式复性来控制蛋白质的折叠。吸附法、反胶束法和双水相萃取等也能用于复性，但复性效率受蛋白质性质影响大，有些蛋白如牛胰RNA酶易于复性，而IL-11等则难以复性。影响复性效率的因素包括蛋白质浓度、pH值、温度、变性剂去除速度等。

提高包涵体蛋白复性产率的方法包括使用氧化还原转换系统（如GSH/GSSG系统）来促进二硫键形成，以及添加低分子化合物如盐酸胍来促进折叠。分子伴侣和折叠酶也有助于蛋白质的复性。此外，非离子型去垢剂、多聚离子化合物等也能提高复性效果。复性效果可通过凝胶电泳、光谱学、色谱和生物学活性测定等方法进行检测。

尽管包涵体复性过程复杂，但通过理解聚集机制和利用相关技术，科学家们正在不断优化复性策略。随着科学技术的进步，预测和设计理想的复性方案有望成为可能，以减少构象病的发生并提高重组蛋白的生物活性。