碱变性法提取质粒dna的原理及过程

Question

如题所述

Answer 1

原理是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。过程如下：
1、将含有目标质粒的细菌或真核细胞进行裂解，释放细胞内的DNA。这可以通过机械方法（如超声波处理）或化学方法（如洗涤剂溶解）来实现。
2、将裂解后的细胞溶液加入高pH（常为12.6）的碱性溶液中。在碱性条件下，DNA的双螺旋结构会解开，变性为单链DNA。在这个过程中，质粒DNA的超螺旋结构会得到部分保留，而染色体DNA则会完全解开。
3、通过加入酸性缓冲液（如pH4.8的NaAc高盐缓冲液）将溶液的pH值调节至中性。这个步骤会使质粒DNA恢复原来的双螺旋结构，而染色体DNA则无法复性。
4、将溶液进行离心，使沉淀下来的物质包括变性的染色体DNA、大分子RNA和蛋白质-SDS复合物等。而质粒DNA会以溶解的形式保留在上清液中。
5、将上清液中的质粒DNA进行提取，常使用酚/氯仿方法或商用DNA提取试剂盒来进行。