实验一 生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
教学目的
初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
实验原理
1．可溶性还原糖+斐林试剂（浅蓝-棕-）砖红色沉淀
呈色反应 2．脂肪+苏丹Ⅲ染液橘黄色（+苏丹Ⅳ染液红色）
3．蛋白质+双缩脲试剂紫色反应
实验程序
一、可溶性还原糖的鉴定
选材：含糖类较高、白色或近于白色的植物组织。
制浆
制备组织液 过滤（用一层纱布）
取液
呈
色
反
应
（注：斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后使用）
结论：可溶性还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀。
关键步骤：斐林试剂现用现配及用量。
二、脂肪的鉴定
取材：花生种子（浸泡3-4小时）将子叶削成薄片
（1）最理想的薄片
（2）在薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液（2-3min）
制片 （3）去浮色
（4）制成临时装片
观察：在低倍镜下寻找已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。
结论：脂肪能被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。
关键步骤：子叶削成理想薄片。
三、蛋白质的鉴定
选材与制备组织样液：卵清或黄豆（浸泡1-2d）
呈
色
反
应
结论：蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。
关键步骤：先加试剂A再加试剂B。
实验的注意事项
1． 还原性糖：分子中含有醛基的糖。如葡萄糖、果糖、麦芽糖。但是蔗糖不是。
2． 斐林试剂很不稳定，帮应将组成斐林试剂的甲液（0．1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0．05g/ml的CuSO4溶液）分别配制、储存，使用时，再临时配制，将4-5滴乙液滴入2ml甲液中，配完后立即使用。
3． 双缩脲试剂的使用，应先加试剂A（0．1g/ml的NaOH溶液），造成碱性的的反应环境后，再加试剂B（0．01g/ml的CuSO4溶液）。否则，紫色会被Cu(OH)2的蓝色遮蔽。
【同类题库】
．在还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，最佳的一组实验材料是(D)
①甘蔗的茎 ②油菜子 ③花生种子 ④梨 ⑤甜菜的块根 ⑥豆浆 ⑦鸡蛋清
A．④⑦⑥ B．⑤①⑦ C．①②⑥ D．④③⑥
．从某生物体细胞中提取出物质A和B，分析其化学元素组成：A中主要含有C、H、O、N等元素，B 中主要含有C、H、O、N、P等元素。A与双缩脲试剂会产生颜色反应，B则易被碱性染料染成深色。由此推断：A物质是 ，B物质是 。
．使用斐林试剂检验还原性糖的正确顺序是（D）
①制组织样液
②加入2ml 0.1g/ml的NaOH溶液
③加入0.01g/ml CuSO4溶液
④加入0.05g/ml CuSO4 溶液
⑤煮沸2 分钟
⑥出现砖红色沉淀
A．①→②→③→⑤→⑥ B．①→（②+③）→⑤→⑥
C．①→②→④→⑤→⑥ D．①→（②+④）→⑤→⑥
．用斐林试剂鉴定可溶性还原性糖时，溶液的颜色变化过程为（A）
A．浅蓝色→棕色→砖红色 B．无色→浅蓝色→棕色
C．砖红色→浅蓝色→棕色 D．棕色→绿色→无色
．有关斐林试剂和双缩脲试剂的说法正确的是（A）
A．两者的NaOH浓度相同 B．两者的CuSO4浓度相同
C．实验时只能采用课本中给定的浓度 D．用两者鉴定物质时都不需要加热
．在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选择，叙述错误的是（A）
A．甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于白色，因此可以用于进行可溶性还原糖的鉴定
B．花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料
C．大豆种子蛋白质含量高，是进行蛋白质鉴定的理想植物组织材料
D．鸡蛋清含蛋白质多，是进行蛋白质鉴定的动物材料
．鉴定脱脂奶粉是否为伪劣产品，需用的化学试剂是（B）
A．斐林试剂 B．苏丹Ⅲ溶液 C．双缩脲试剂 D．红墨水
．（多选）鉴定脱脂淡奶粉是否为伪劣产品，需用的化学试剂是（ABC）
A．斐林试剂 B．苏丹Ⅲ溶液 C．双缩脲试剂 D．红墨水
．下列能与斐林试剂反应生成砖红色沉淀的是（D）
①葡萄糖 ②果糖 ③蔗糖 ④麦芽糖 ⑤淀粉 ⑥纤维素
A．①②⑤ B．②③④ C．①⑤⑥ D．①②④
．（多选）下列关于实验操作步骤的操作中，正确的是（BE）
A．用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定
B．脂肪的鉴定实验中，需用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴
C．鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液后再加入乙液
D．用于蛋白质鉴定的双缩脲试剂A液和B液，要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且现配现用
E.实验前最好检测一下蔗糖溶液和葡萄糖溶液的纯度
．下列物质中，与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应最明显的是（B）
A．苹果组织样液 B．豆浆 C．浸软的油葵种子 D．马铃薯组织样液
．在使用斐林试剂和双缩脲试剂来鉴定组织中还原糖和蛋白质实验中，两种试剂的主要区别是（C）
A． 配制时所用的CuSO4．NaOH溶液浓度都不相同，加入到组织样液的时间顺序也不同
B． 配制时所用的CuSO4．NaOH溶液浓度都相同，只是加入到组织样液的时间顺序不同
C． 配制时所用的CuSO4溶液浓度不相同，加入到组织样液的时间顺序也不同
D．配制时所用的NaOH溶液浓度不相同，加入到组织样液的时间顺序也不同
．在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，下列有关实验操作步骤的叙述中，正确的是（B）
A．用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定
B．脂肪的鉴定实验中需要用显微镜才能看到被染成黄色的脂肪滴
C．鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液
D．用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液和B液要混和均匀后，再加入含样品的试管，且必须现用现配
．实验可知，在尿素溶液中加入双缩脲试剂，也能产生紫色反应，根据鉴定蛋白质的原理说明之。
[蛋白质鉴定实验中与双缩脲试剂产生紫色反应的是蛋白质分子中的肽键（-CO-NH-），在尿素分子中也有这样的键（NH2-CO-NH2）。]
．根据“生物组织中还原性糖的鉴定”的实验原理，设计一个鉴定淀粉酶对淀粉具有消化作用的实验。（实验材料、用具俱全）
[（1）取两支试管编号1、2，分别注入2ml可溶性淀粉溶液。（2）向1号试管内加入2ml新鲜的淀粉酶溶液，2号试管内加入2ml蒸馏水，摇匀，并恒温水浴（37℃）10min。（3）分别向两支试管中各加入2ml刚配制的斐林试剂，混匀，并沸水浴2 min，观察溶液的颜色变化。结果：1号试管内有砖红色沉淀，2号试管内无砖红色沉淀，说明淀粉酶对淀粉有消化作用。
．某商场所卖脱脂奶粉被坏疑为假冒伪劣产品。生物学研究性学习小组的同学想把调查脱脂奶粉的合格率作为研究课题，假如你是成员之一，请你鉴定真假脱脂奶粉。
（1）资料收集：a．全脂奶粉含有蛋白质、脂肪和乳糖等成分，脱脂奶粉则具有高蛋白、低脂肪的特点。b．假冒脱脂奶粉有两种：一是用全脂奶粉冒充脱脂奶粉，二是用淀粉冒充。
（2）鉴定是否用淀粉冒充：
。
（3）鉴定是否用全脂奶粉冒充：
。
（4）结果分析：
。
（5）通过以上鉴定，我们并不能完全肯定是正宗的脱脂奶粉，还必须对其 含量进行鉴定。
[（2）将采样来的“脱脂奶粉”少许配成适当浓度的溶液，向其中滴加1-2滴碘液，观察颜色变化。（3）将采样来的“脱脂奶粉”和全脂奶粉各少许配成溶液，分别加入A、B两试管中；向两试管中各加入2-3滴苏丹Ⅲ染液；比较A、B试管内的颜色变化。（4）如果（2）中试管内溶液变蓝色，证明是用淀粉冒充的，不变蓝则证明不是用淀粉冒充的；如果（3）中A、B两试管橘黄色（或红色）对比不明显，证明是用全脂奶粉冒充；如果A试管颜色比B试管明显淡了，则证明不是全脂奶粉冒充的。（5）蛋白质]
．某学生为了验证唾液淀粉酶的特性，设计了以下6组实验。6组试管振荡混合后，都作了如下处理：恒温（37℃）处理15分钟；各加入2ml斐林试剂，并振荡使之混合；再将6组试管放入沸水浴中加热1分钟。注：出现砖红色氧化亚铜沉淀，证明有还原糖（麦芽糖、葡萄糖、果糖）存在。请回答：
加入的物质 试管号 1 2 3 4 5 6
1%淀粉溶液 2ml 2ml 2ml 2ml
2%蔗糖溶液 2ml 2ml
稀释的唾液 1ml 1ml 1ml 1ml
蒸馏水 1ml 1ml 1ml
稀盐酸 1ml
（1）几号试管会有砖红色沉淀出现？
（2）1号和3号试管能否进行对照实验？实验结果能证明什么？
（3）若要证明唾液淀粉酶的催化活性受PH的影响，则最好选择哪两号试管作对照？
（4）本实验能证明唾液淀粉酶具有专一性吗？为什么？
[（1）3号和6号试管会出现砖红色沉淀（2）能，实验结果能证明唾液淀粉酶能催化淀粉水解形成还原糖（麦芽糖）（3）5号和6号试管作对照（4）能，判断依据是：1号和3号试管对照实验的结果证明唾液淀粉酶能催化淀粉的水解，而2号和4号试管对照实验的结果证明唾液淀粉酶不能催化蔗糖的水解，因此能说明唾液淀粉酶催化作用具有专一性]
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