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荧光定量溶解曲线温度
荧光定量
pcr中
溶解曲线
的
温度
大概是多少
答:
一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,
一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度(假定65度为退伙温度).在65度时
,pcr产物是以双链的形式存在的。因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。
荧光定量
PCR绘制
溶解曲线
应该从多少度开始?
答:
实时PCR产物的Tm值大小一般会在80°上下,所以
溶解曲线
不必从40°开始,可以从65°开始进行溶解曲线绘制,另外在产物之前出现的小峰,同时也在阴性对照中出现了,应该是引物二聚体或者是非特异的扩增。
怎么理解
荧光定量
pcr的
溶解曲线
答:
荧光定量
pcr的
溶解曲线
理解:用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一。应结束后,逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随
温度
升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合。一般每加温一度,读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧...
荧光定量
PCR熔解
曲线
答:
溶解曲线是在正常的PCR反应基础上加一个溶解曲线的反应条件,
其中当温度由60℃升至95℃时
,PCR仪每隔一定的温度检测一次信号。最后将收集的信号绘制出溶解曲线,然后将溶解曲线一次微分就会得到我们平时看到的峰性图。每一条线代表着某个孔里的反应体系里产物的单一情况,某一条线如果为单峰且在一定合理...
您好,我想问一下
荧光定量
PCR产物的
溶解曲线
的Tm值在92度可以吗?是不...
答:
这个不是绝对的,只是大多数RT-PCR产物的TM值会落在那个范围内,有些目的片段很长的产物有可能会稍微大一点。这跟目的片段长度有关系。主要看产物是否为单一峰,是否有杂峰。
荧光定量
PCR绘制
溶解曲线
应该从多少度开始
答:
我们机器设定的是从60度开始
您好,我想问一下
荧光定量
PCR产物的
溶解曲线
中Tm值在92度左右可以吗?是...
答:
这个是可以的。根据扩增产物GC含量的不同,TM有可能很高。只要解离
曲线
有一个很锐的峰,就没有问题。我以前为了提高特异性,专门设计过高TM值的引物。
谁能具体解释一下
荧光定量
PCR中
溶解曲线
的意思以及作用
答:
溶解曲线
是判断扩增产物是否单一的曲线,顾名思义,其跟模板(或其浓度)没有关系,扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线,类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰(一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间),我说的是一般情况,这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二...
荧光定量
PCR中
溶解曲线
在60度左右出现大峰怎么办
答:
60度左右,片段很短,极有可能是引物二聚体,你分析一下你设计的引物,看看是否有引物自身和自身退火延伸的情况发生
你好,我在百度上看见你说
荧光定量
PCR的TM高达92度,一般没有那么高吧...
答:
这个
溶解温度
是可以预先设计的。某些特定的序列为了提高特异性,就专门找一些GC比例高的区域来做。结果当然是可靠的。这个
溶解曲线
图一般只记录到95度就停止了。你可以设到100度,这样后面就有了。不过你要是理解了这个曲线的意义,就会明白有没有的区别不大。
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