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荧光定量pcr溶解曲线峰值不单一
荧光定量pcr
结果出现的峰有很多个,不止一个,而且内参的峰也是很多个,内...
答:
溶解曲线不止一个主峰1、引物设计不佳:避免二聚体和发夹结构的出现
;2、引物浓度不佳:适当调整引物浓度;3、退火温度低:提高退火温度;4、镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度;5、模板中有基因组的污染:通过引物设计避免非特异扩增。
怎么理解
荧光定量pcr的溶解曲线
答:
荧光定量pcr的溶解曲线
理解:用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一。应结束后,逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合。一般每加温一度,读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧...
荧光定量pcr溶解曲线
没有峰
答:
荧光定量pcr溶解曲线
没有峰是因为:一般每加温一度,读一次信号,当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多,曲线的横坐标是温度,纵坐标是荧光信号的变化,开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的。当加热接近于PCR产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小,机器会比较前后2个温度点的荧光强度,把2者...
谁能具体解释一下
荧光定量PCR中溶解曲线
的意思以及作用
答:
溶解曲线
是判断扩增产物是否
单一
的曲线,顾名思义,其跟模板(或其浓度)没有关系,扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线,类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰(一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间),我说的是一般情况,这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二...
荧光定量PCR
熔解
曲线
答:
某一条线如果为单峰且在一定合理的温度范围内(一般为80~90℃)则认为正常,如果为双峰则可能有非特异性扩增。由此可以判断产物是否为目的基因且是否
单一
。内参有内参的线,目的基因有目的基因的线,同一条线不会出现两个基因的峰。你可以看一下
溶解曲线
的横、纵坐标。
荧光定量PCR 溶解曲线
与什么有关
答:
荧光定量
的
溶解曲线
主要是看是否存在非特异性扩增,如引物二聚体等,当只有
单一
峰时且值在退火温度说明特异性扩增,结果可用
荧光定量pcr溶解曲线
为什么会有一个急剧的上升连着急剧下降,形成一个...
答:
当温度达到Tm值时候,DNA就会变性分成单链的,此时
荧光
染料不能结合NDA所以检测的荧光型号越来越弱。你说的出现的峰是荧光性号对温度求导后得到的
曲线
图,出现峰是因为在接近Tm值的位置荧光性号下降的斜率很快导致在对温度求导后出现峰。出现单峰说明没有非特异性的结合和引物二聚体的产生。
q
pcr溶解曲线
很好,但是标准方程不成线性关系的原因
答:
你的移液器需要校正,还有,尽量使用低吸附的枪头。不成线性,说明是
曲线
首尾的浓度偏离较大。
溶解
峰
单一
表明
PCR
产物特异性好,最大峰处对应的温度为PCR产物(不是引物)的Tm值,此时产物DNA片段一半为双链,一半为单链。此外,PCR形成的引物二聚体溶解峰会在低于80°出现(分子量小)。
酿酒酵母rt-qpcr内参用哪个基因
答:
最近我做了
荧光定量PCR
,每次做的时候
溶解曲线
效果就很差,不是
单一
的峰,说明是有非特异性的扩增,但是在普通PCR仪上做的PCR时,只显示了一条带,很清晰,是怎么回事啊?荧光定量的灵敏度太大了么?还有斑马鱼的内参基因怎么选取?做的是相对定量。答:你说对了,荧光定量的灵敏度太大了。你要明白件...
PCR溶解
度
曲线
怎么看?
答:
单峰表示产物
单一
,说明你设计的引物较特异 双峰的话,说明除了目标产物外还有其他的影响
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