荧光定量pcr中溶解曲线的温度大概是多少

Question

如题所述

Answer 1

　　一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）.在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。
　　因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。

Answer 2

Realtime PCR的溶解曲线的出峰温度一般在85度——90度，溶解温度是指核酸片段解链一半时的温度。哪些因素影响熔解温度呢？PCR产物大小，GC含量等，一般的熔解温度是要大于80度的。我们实验室用BIOGHC -PCR检测了DNA,溶解曲线是为了验证扩增产物特异性的