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不知道序列怎么设计引物
对于
不知道序列
的目的基因
如何
来
设计
它的
引物
答:
不知道序列,知道是什么基因的话,
可以根据物种之间的同源性在保守区域设计引物,然后再用race等技术扩全长
,如果基因名字什么都不知道的话。。。那就图位克隆。。
不知序列
的DNA模板PCR
引物
的
设计
答:
一个引物要根据模板两端序列的性质来设计
。
引物的设计要符合以下原则:1、G+C含量45~55%,2、长度15~25个核苷酸,3、奈温大于55摄氏度
,4、扩增跨度300~500为宜,5、引物最末端倒数第二个碱基要严格要求配对,6、不能含自身互补序列,7、引物中有或能加上合适的酶切位点 ...
如何设计引物
答:
设计引物需要遵循一定的原则和步骤,以确保引物的特异性和有效性。
首先,需要确定目标基因序列,并选择合适的引物设计软件或在线工具
。然后,根据设计原则,选择合适的引物序列,并进行评估和优化。最后,通过实验验证引物的特异性和扩增效率。引物设计是PCR实验中的关键步骤,因此需要认真对待。在选择引物设计软...
...
不知道
模板DNA的核酸
序列
的情况下
如何设计
PCR
引物
?求高手给出具体步...
答:
一般来说,RT-PCR的时候很多情况下会
不知道
模板DNA的序列,可以在Genbank中寻找和你要扩增的物种的亲缘关系较近的物种的同源基因,多找几种,用DNAMAN或其他软件可以比对它们的序列,这样可以得出这种基因在进化过程中的保守序列,根据这个保守
序列设计引物
来PCR,扩增出来的机率就大多了。
怎样设计引物
?
答:
1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计
。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间,Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A,最好选择T。6、碱基要随机分布。7、引物自身及引物之间不应存在互补序列。8、引物5′端和中间△G值应该相对...
怎么设计引物
答:
8、引物5’端可以修饰。引物5’端
序列
对PCR影响不太大,因此常用来引进修饰位点或标记物。验证引物的特异性:在“Primer Pair Specificity Checking Parameters”区,选择
设计引物
或验证引物时的目标数据库和物种。这一步是比较重要的。这里提供了7种数据库:RefSeq mRNA,Refseq representativegenomes,nr,...
...
序列
是未知的,那我们
设计引物
是根据其近缘种的基因设计
答:
可以根据其其近缘种的保守基因
序列设计
,但通常都很难得到全长。要得到基因全长,可先得到中间片段序列,然后RACE或者Inverse PCR都可以尝试下。如果近缘种序列同源性很高,还可以参考其他物种序列,设计几对
引物
,直接扩增基因全长。
...但是
不知道
内参的
序列
,如果NCBI上没有该
怎么设计
内参的
引物
呢?求各...
答:
啥都没有的话是无法
设计
的 首先你可以克隆获得内参的
序列
,再进行下一步实验
如何设计引物
答:
(6)上下游
引物
的互补性:一个引物的3‘末端
序列
不允许结合到另一个引物的任何位点上。(7)3’末端:如果可能的话,每个引物的3‘末端碱基应为G或C。(8)引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。2、探针
设计
原则:(1)靶基因的确定:选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。...
怎么设计引物
答:
2.
引物
末端: 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;引物 3’端应避免出现发夹结构。3. 引物G+C:含量 引物的GC含量控制在40%-60%之间。4. Tm值:引物额外附加
序列
,即与模板非互配对序列,不应参与引物 Tm 的值计算;正向引物和反向引物的Tm值相差不超过5℃为佳,Tm值调整至55℃ -65℃为...
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