免疫荧光 定位

Question

今天考研，考一道免疫荧光的问题，叫我说出一种实例

我是这样回答的：比如想知道一种蛋白质在细胞内的定位，可以用一这种蛋白质为抗原的抗体加上荧光标记，注入到细胞内，根据荧光便可以确定此蛋白在细胞中的位置

我知道我这样的回答是不对的，题目总分是10分，请问我这样大概能得几分？

Answer 1

你所说的方法是采用荧光素分子直接标记抗体，在免疫荧光中被称为直接法。
更多的做法不是采用直接法而是采用间接法，也就是用对应某一种抗原的抗体（这里被称为一抗）与细胞孵育结合，在采用对应一抗（也就是抗一抗）的抗体（这里被称为二抗，二抗上偶联有荧光素分子）与细胞孵育结合后在荧光显微镜下观察。
间接法较直接法能够有效降低背景荧光，提高信噪比，同时由于抗体的放大效应使得检测灵敏度大大提升。
我就在做这方面的研究工作，如果需要的话可以共同探讨。
举例：对细胞微管蛋白进行亚细胞定位，，用低聚甲醛固定细胞，NP-40穿孔，选择抗微管蛋白的抗体作为一抗，孵育后洗脱去背景，加入偶联荧光素的二抗孵育后洗脱去背景，，上荧光显微镜观察。
希望能够对你有所帮助。

Answer 2

...你只是把原理答上来了，并没有举出实例。
可能能得5~7分吧。