老鼠眼睛对光非常敏感,但却差不多是色盲，善于攀爬及游水。老鼠主要在黑暗处及夜间活动，但寻找食物或数量很多时日间亦能看见鼠影。沟鼠主要于水渠、垃圾房等地方出没；家鼠多于天花板、阁楼、地下室等地方活动；而小家鼠则藏匿于屋内隐蔽处如厨柜后、抽屉内、贮物室等地方。老鼠食性非常杂乱，无论谷物、米、花生、饼干以至香肠鱼肉等等均是它们的美食。而老鼠因长有两对生长快速的门牙，每年可长约13公分，所以老鼠要不停咬硬物以磨损门牙，否则门牙会过长及向后卷入，令它无法觅食而死亡，所以有老鼠之处很多东西如门框、屋顶、电线等均会被老鼠咬破并留下木屑。一些火警便是因老鼠咬烂电线短路而产生。
背部中央有一黑色条纹，从两耳之间一直延伸至尾基，少数地区的类型黑纹不明显或无此纹。腹毛灰白色。尾长相当于体长的
分布很广，平原、丘陵、山地、湖洼地去均有，以平原的农业区较多，有些草原、森林边缘和采伐迹地上也能见到。喜居于向阳、潮湿、近水处。在农业区内，多栖息于农田、田埂、提边、土丘、杂草丛及柴草垛中。在各种农田中，以稻、豆地鼠密度较高。大田埂鼠数一般多于小田埂，但如大田埂为粘性大的沟底土筑成时，由于土质坚硬打洞艰难，则情况相反。洞穴较表浅，构造简单，可分为两类；一类是栖居洞，有两个或两个以上的洞口（前、后洞或天洞），洞道膨大部分内有干草或豆叶等作成的窝巢；另一类是临时洞，只有一个洞口，内无窝巢。天气温暖或多雨季节，窝巢较浅；严寒季节，窝巢较深。
食性杂。以植物性食物为主，主要吃种子、植物的绿色部分及根、茎等，稻、麦、豆类、高粱、番薯皆所嗜食。食物随季节而异。秋、冬两季以种子为主要食物，佐以植物的根和茎。春季捕食昆虫和麦苗等。夏季食植物的绿色部分、瓜果及昆虫等。
月的降雨量对秋季作物收成和黑线姬鼠数量的影响较大。
主要在夜间活动，黄昏和清晨最为活跃，白天较差。不冬眠，春、秋两季较活动。随自然条件和食物来源而迁移。放水或大雨后田中积水时，向田埂集中。多雨季节，向地势较高处转移。夏季天气炎热，作物生长茂盛，隐蔽条件良好，且这时谷物尚未成熟，，田中食源少，又非主要繁殖季节，故多不挖洞筑巢，随食源而流动。入秋后，天气转寒，又值繁殖高峰季节，多筑巢以避寒和产仔，这时田埂、堤坝上的鼠洞明显增多。入冬后，田野食源缺少，加以洞中不存粮或存粮很少，故有的鼠迁至附近的晒场和草垛中，少数进入住室。开春转暖后，又返回田野。在水利工地，如未做好灭鼠、防鼠工作，鼠可进入工棚。据在安徽某些湖洼地区调查，黑线姬鼠的数量受降雨量和河水水位高低的影响，降雨量大，水位高时，鼠数量少，反之则多。
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