叶绿素提取,分离及黄酮含量测定这个实验黄酮怎么测？

Question

如题所述

Answer 1

仪器与试剂
新锐T6型紫外可见分光光度计；Explrer型电子天平（0.1mg）。 60%的乙醇溶液；5%亚硝酸钠溶液；10%硝酸铝溶液。
芦丁标准溶液的配制
称量13.2mg芦丁，用60%乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。 标准曲线的制作
准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。
3.6.4 总黄酮提取与测定和计算
称取0.6—0.8g样品粉末，加入60ml60%乙醇放于100ml圆底烧瓶内，置于水浴锅上，70℃条件下回流提取60min。过滤、定容于100ml.
吸取样品量（根据样品的吸光度调整）1.0ml，放入10毫升容量瓶内（写明标记），用60%乙醇加到2.0ml；加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60%乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量。
总黄酮含量=A/Mx100x稀释倍数（A为标准曲线中的含量，M为样品的质量(mg)）

Answer 2

叶绿素提取，用80%丙酮而不是100%丙酮，详解如下：
首先叶绿素在丙酮中极易溶解 在做叶绿素层析的时候 其原理就是利用不同叶绿素在层析液中的溶解度不一样 在滤纸上引起扩散速度不同 如果是100%的话 几种叶绿素在丙酮中的溶解度都差不多 就不能达到理想的分离效果 如果采用80%的话 能有效的将4种色素溶解并造成不同的溶解度 其次跟丙酮的物理性质有关 丙酮是一种极易挥发的有毒的有机溶剂，味道特别大 丙酮主要是对中枢神经系统的抑制、麻醉作用 高浓度接触对个别人可能出现肝、肾和胰腺的损害 实验室中大规模做叶绿素层析的学生实验 不可能每个人都有必要的防护措施 这也是为了减小有机溶剂对人体造成的伤害 实际上在生产上用丙酮提取叶绿色 都是用的96%以上的丙酮 因为丙酮沸点低 在生产上都是可以重复利用的 丙酮浓度越高叶绿素溶解度越大 而且生产上不需要将几种色素分离 具体丙酮的浓度的调节有时要结合脱水程度，萃取浴比等因素考虑