用western检测真核表达的带有flag标签的融合蛋白时，能用目的蛋白本身的抗体进行检测，但用flag抗体确无法

在确保western条件没有问题的情况下，我在检测N端带有flag标签的融合蛋白时，用目的蛋白本身的抗体能检测到蛋白的表达，而用抗flag的抗体却无法检测到目的大小的条带，flag标签是载体自带的，抗体也是经验证无误的，我感到很困惑的是，为什么用flag的抗体检测不到目的条带呢？

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推荐答案 2011-02-18

看你的flag抗体是否有问题，我是做抗体生产的，原来开发flag抗体时就会对其进行C端、N端、M端的Qc检测，正常情况下三端都需要有识别，我担心你的抗flag抗体有可能不识别N端，还有一种可能就是你的融合蛋白不含flag标签。你可以从这两个方面入手解决，至于你运用什么实验设计，我想你应该完全没问题。预祝你能够顺利解决此疑问。

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其他回答

第1个回答 2011-02-19

你能确定你的FLAG标签管用吗？如果FLAG标签失效了，什么都白搭。

第2个回答 2011-02-15

做western时候导致失败的因素太多了楼主能再说的详细些吗？站内吧

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如何收集带flag标签的蛋白?答：带flag标签的蛋白，用其他的抗体也能检测出来。用flag抗体还是其他抗体条带的位置都正确。lag标签一般不影响细胞定位的，这个蛋白本身的细胞定位是哪里，融合之后还是哪里啊。就是利用flag标签蛋白如何检测它一起的融合蛋白是否进入了细胞做细胞染色或者提取细胞的蛋白质做Westernblot检测，确保检测到的信号是阳...

你好,我在网上看到你的提问,即:用western检测真核表达的带有flag标签...答：是用flag抗体杂不到带？

falg标签western blot 抗体为什么可以与变性的蛋白结合答：Flag标签融合蛋白一般都是非变性表达的 做WB的话，不管是否是变性蛋白，和SDS结合后都会打开原有的结构暴露出N端或者C端的标签，这样就有了抗原决定簇，抗Flag标签的抗体会和抗原决定簇起免疫反应。所以说作为抗原，是否变性都没关系的。

flag tag是什么答：FLAG作为标签蛋白，其可以被抗FLAG的抗体识别，这样就方便通过Western Blot、ELISA等方法对含有FLAG的融合蛋白进行检测、鉴定。融合在N端的FLAG，其可以被肠激酶切除（DDDK），从而得到特异的目的蛋白。因此现FLAG标签已广泛的应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等相关领域。一个什么公司的...

基因与flag融合表达会影响基因功能吗答：2.能够对目的蛋白的表达进行定量，比如通过测定荧光强度转化为量化值，间接反应目的蛋白表达的强度 3.由于PEGFP质粒带有筛选标志，还可以进行稳定转染的筛选，标记上荧光，有利于稳定转染的筛选。我个人认为1和3没有什么问题，但对2来说我认为最好用WESTERN来定量，用GFP的抗体就可以。MYC，HIS6，除了用...

常见的融合蛋白表达标签有哪些呢?答：MBP标签 MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP标签可通过免疫分析很方便地检测。有必要用位点专一的蛋白酶切割标签。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。纯化:融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一...

我用FLAG单抗做western blot, 检测不到含FLAG标签的目的蛋白,你觉得是...答：这个Flag标签抗体能检测到其他带Flag标签的蛋白吗？例如空载对照。如果空载也不行，那基本抗体就歇了。如果有，就要看Flag标签是不是正确表达了，如果表达不正确也会影响到检测的。

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