急求：关于EMSA实验中纯蛋白溶剂的问题！

Question

His-Tag纯化后得到的纯蛋白溶在了含一定浓度的咪唑溶液里，在做EMSA之前是不是需要更换溶剂？一般是更换什么溶剂？

Answer 1

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等;
2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等;
3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失;
-1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1
蛋白被降解;
6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v)
7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质;
8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间;
9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染
组氨酸标签蛋白的纯化