乳酸脱氢酶LDH实验

如题所述

乳酸脱氢酶(LDH)实验是一种利用纯化的抗体进行的生物化学测定,它是一种催化乳酸和丙酮相互转化的酶,广泛存在于动物组织中,尤其在肝脏、心脏、骨骼肌和肾脏中活性高。在病理情况下,如肿瘤和白血病,LDH的含量也会增高。乳酸脱氢酶有L和D两种类型,其活性依赖于特定的肽链四聚体结构。


实验的原理是利用抗体包被的微孔板,通过添加标本、生物素化的抗体和HRP标记的亲和素,形成一个检测系统。样品中的D-LDH与抗体结合后,通过酶标记的亲和素链,进一步与底物TMB反应,生成的蓝色化合物在酸性条件下转化为黄色。颜色深浅与D-LDH浓度正相关。通过酶标仪在450nm波长测量吸光度(OD值),进而计算样品中D-LDH的浓度。


实验所需的主要试剂和器材包括酶联板、标准品、样品稀释液、标记抗体溶液、标记亲和素溶液、底物溶液、洗涤液和终止液,以及特定的实验器材如酶标仪、离心机、恒温箱、移液器等。操作步骤包括加样、洗涤、标记抗体和亲和素的添加,以及底物和终止液的反应测量。在实验过程中,应注意避免起泡、充分洗涤和快速加样,同时每次实验需制作标准曲线以确保准确性。


注意事项包括轻柔混合蛋白、充分洗涤以减少干扰、控制加样时间、做复孔以提高可靠性、适当稀释高浓度样本、正确配制试剂、避光保存底物,以及避免替换试剂盒中的标准试剂。




扩展资料

乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。

温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
相似回答
大家正在搜