如何选择和免疫动物以获得高效价抗体?

如题所述

在免疫学研究中,动物多克隆抗体技术起着关键作用。常见的免疫动物包括哺乳动物(如家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠)和禽类(如小鼠),选择依据是抗体的需求和抗原特性。


为了获得大量抗体,通常会选择大动物;而直接用于标记诊断的抗体,通常会直接使用本动物。若需间接标记抗体,则需异源动物制备;对于罕见或少量抗体需求,纯系小鼠是理想选择。实验室常用的抗体制备,通常选用兔和羊。


免疫动物应选择适龄健康雄性,雌性动物特别是妊娠期不宜用于制备,因为可能影响抗体产生。同时,由于个体差异,免疫过程中会选用多只动物进行。


抗原种类繁多,包括蛋白质、类脂、多糖和核酸。完全抗原和不完全抗原的特性各异。为了获得优质抗血清,优选蛋白质抗原,尤其是可降解的类型,因其免疫原性强。免疫剂量因动物种类、免疫周期和抗体需求而异,过低或过高都可能导致问题,通常小鼠首次剂量为50-400μg,大鼠为100-1000μg,兔为200-1000μg,加强计量为首次剂量的1/5-2/5。


注射途径和佐剂也影响剂量,静脉注射大于皮下,皮下又大于局部注射。弗氏佐剂会调整剂量,低剂量抗原短程免疫有助于提高特异性,大剂量长程免疫则可获得高效价抗体。两次注射间隔时间应适中,一般5-7天,佐剂情况下需2周。


纯度高的Ig通常不易引发过敏反应,但使用血清时需谨慎,因为即使是少量,再次免疫时也可能引发过敏,因此必须采取预防措施。


扩展资料

抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。

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