细胞铺板有什么技巧吗?力求均匀

如题所述

1、一般96孔板,每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再,继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。

6孔板12孔板或24孔板,均采用将第一个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。

2、细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。

3、如果实验室有平板振荡器的话,我建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,就是振幅小,频率高的那种。

4、细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮!还有转移到六孔板后,是要晃得!晃的时候最好不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了,就会不均匀!

5、一瓶细胞长满后,正常处理,在培养瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放到培养箱里,轻微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。

6、计算好所需要的全部液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下观察,如果不均匀,按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子,瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。

7、放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,否则很容易就又聚到中间去了。
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第1个回答  2012-10-13
尽量不要手动铺板,会产生较大的variation,导致复孔之间产生差异。建议使用机器来完成这个步骤,如Thermo公司的Multidrop Combi,配合使用一个迷你磁力搅拌器,可以使细胞在铺板时在每个孔内是相对均匀的。
第2个回答  2019-03-19
要铺成那种很均匀的单层细胞,步骤如下:
1,细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基,放入孵箱中放置10-20min。
2,在滴入细胞时,细胞板子与通风橱有一定的角度,沿着板壁的孔边缘滴入。
3,滴入后,呈“8”字方法摇晃5-8次。
4,置于水平台上,放置10-20分钟
5,放入孵箱。
第3个回答  2012-10-11
细胞铺板重在均匀。
细胞铺板时,要每孔分布的细胞数量一致,就是从瓶中吸取细胞悬液的时候,每次吸取都要混匀后吸取,尽量做到平均分配。
其次,铺板后用手拍打板壁,动作轻柔些。本回答被网友采纳
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