血清乳酸脱氢酶的注意事项

Question

如题所述

Answer 1

(1)、比色法：　　①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物，但因其为水溶液，含量不够准确，且保存不当易产生酮酸类物质，抑制酶促反应。而乳酸锂为固体，稳定，易于称量。　　②除二乙醇胺缓冲液外，也可用Tris或焦磷酸缓冲液，避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用，提高了阳性检出率。　　③比色应在5-15min内完成，否则吸光度降低。　　④结果>2500U时，可用生理盐水稀释标本后再测，其结果乘以稀释倍数。　　(2)、连续监测法：　　①标本勿溶血，当溶血达Hb 0.8g/L时，LDH活性可升高58%。　　②标本于室温(25℃)保存，2天内酶活性稳定，冰箱保存酶活性降低，-20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。　　③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意，草酸盐可抑制LDH活性。　　④复溶后溶液变浊或初始吸光度>0.5应弃去。　　⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性，但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同，其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物，在340nm监测吸光度增高速率为正向反应，以LD-L表示;以丙酮酸和NADH为底物，监测340nm吸光度下降速率为逆向反应，以LD-P表示。正逆反应两法相比，LD-L法的主要优点是：A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大，前者冰箱可保存6个月以上，而后者仅几天;B.速率反应的线性范围(吸光度对监测时间t作图)较宽;C.重复性比LD-P好。由于逆向反应速度比正向反应速度快，其参考值约为LD-L的2倍。