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rt-pcr和pcr引物设计为什么会有不同
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推荐答案 2017-02-07
RT-pcr的核心还是PCR,模板是CDNA,只不过这个CDNA是RNA反转录来的~~~NCBI上给的是CDNA的序列
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RT-PCR与
时时
PCR的
原理及
引物有什么
区别?
答:
RT-PCR和一般的PCR相比原理上没有太多的区别,
无非就是在反转时候RNA的定量,不同模板的设定
。对引物没有特别的要求,能特异代表目的基因就行。real-time PCR根据原理的不同,引物选择也不同。通常用的是SYBR Green的方法,这种方法引物在RT-PCR的基础上需要注意:1.退火温度同内参;2.片段长度不要超...
RT-PCR
用的
引物与
以DNA为模板的普通PCR一样吗?
答:
不一样,
RT-PCR扩增的片段较短.普通pcr是为了扩增某一片断
,引物设计时会倾向于要扩增的目的片段.而RT-PCR主要是为了检测,引物设计侧重于检测片段的特异性和引物的有效扩增.所以,这两个pcr的引物设计软件也是不同的.
PCR与RT-PCR的
比较
答:
它们的区别在于,
从体外扩增核酸的角度来说
,因为一般PCR用的酶只能以DNA为模板,对模板已经是DNA分子的材料而言,可以直接进行PCR反应,而对于模板是RNA分子的材料而言,必须先经RT即反转录酶将RNA转化为DNA的步骤,才能进行下一步的PCR反应。
PCR,
RT-PCR
,实时荧光定量
PCR的
区别
与
联系
答:
2、
RT-PCR
一般情况下是指反转录PCR(reverse transcription),尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也(realtime fluores-cence quantitative PCR)也简称RT-PCR,但是这是不对的,不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录,然后将所获得的cDNA作为模板,
设计引物
进行扩增,是一种检测基因表达的常用方法...
PCR和RT -PCR的
区别与联系
答:
PCR这里是指常规的PCR吧?就是以DNA为模板,dNTP为原料,在Taq DNA聚合酶的作用下,扩增DNA。
RT-PCR
即Reverse transcription-PCR,顾名思义就是讲mRNA通过反转录成第一链cDNA后,以第一链cDNA为模板进行PCR。
做pcr,
rtpcr和
做克隆基因的
引物有
何
不同
答:
不同
点很多。最简介回答,是目的不同,侧重点也不同:普通pcr。只考虑能不能扩增出来就行。
rtpcr
。上荧光的话,对引物质量要求高,得做个hplc或者page纯化;其次对
引物设计
要求高,考虑得率,特异性等因素。克隆引物。考虑加入常见酶切位点,导入何种目的载体,碱基密码子偏好性等。
普通
RT-PCR与
实时荧光定量
PCR的引物有什么
区别
答:
实时定量的
引物设计
要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了 ...
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