1519年西班牙国王查理一世当选为“
神圣罗马帝国”皇帝（即查理五世）后，法国和西班牙之间一共发生了6次战争。被卷入的有罗马教皇、
威尼斯、瑞士、英国和土耳其。查理五世力图把法军赶出意大利，他得到英国、罗马教皇、曼图亚和
佛罗伦萨等国的支持，威尼斯则是法国的同盟军。1521年战争爆发，1522年法军在比科卡战中失利，德国雇佣军打败了担任法军突击力量的瑞士雇佣军。1525年2月的帕维亚一战，法军惨败，法皇被俘。1526年，法皇法兰西斯一世回国后立即加入罗马教皇在英国支持下建立的旨在使意大利摆脱西班牙桎梏的“科尼亚克同盟”，参加同盟的还有威尼斯、米兰和佛罗伦萨。1527年，战争再度爆发，双方各有胜负。1529年，法国在不利形势面前被迫与查理五世签订和约并放弃对意大利的主权要求。7年过后，法兰西斯一世再次挑起战争，占领了皮埃蒙特和萨伏依。1538年，法国和“神圣罗马帝国”签订为期10年的停战协定。法国使者在米兰被杀一事引起了1542—1544年的战争。法国同
丹麦、瑞典、
奥斯曼帝国结盟，查理五世与英国结盟。法军先后占领威尼斯和马里尼亚诺，但查理五世却攻入法国境内。双方于1544年签订《克雷普和约》。1551年再度爆发意大利战争。交战双方互有胜负，谁也不占明显优势。1559年4月，法西缔结《卡托—康布雷西和约》，正式结束了法国对意大利的争夺，西班牙在米兰公国、那不勒斯王国、西西里和撒丁的统治得以巩固，意大利的分裂局面依然继续。