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http://www.cqvip.com/qk/98340X/200802/27822236.html 一、无菌培养物的建立 ：建立无菌培养物的三项技术： (1)外植体的选择 (2)灭菌 (3)诱导培养对于易褐变的外植体还要有防止褐变的措施。1、 外植体的选择（1）遗传表型选择：（2）生理状态的选择：（3）取外植体的部位：（4）取外植体的季节和时间：（5）外植体大小与诱导成功率：2、外植体的灭菌消毒原则既要彻底消灭外植体表面的微生物，又要保持外植体正常活力。消毒剂良好的消毒作用，又要易被无菌水冲掉或自行分解掉。消毒程序消毒剂种类、浓度和消毒时间。 目前常用消毒方法：首先70～75％酒精，30秒，表面杀菌，后用其他消毒剂消毒；如： 0.1％升汞，5～10分钟 2～5％次氯酸钠，5～30分钟茎尖、茎段、叶片消毒程序：——70％乙醇30秒 —— 无菌水2～3次 —— 2～5％次氯酸钠10～15分 —— 无菌水3～5次种子的消毒程序：——10％次氯酸钠20～30分——无菌水3～5次根的消毒程序：——自来水冲洗——纯乙醇漂洗——0.1％升汞5～10分——无菌水3～5次3、诱导培养（1）外植体的切割：叶片0.5～0.8 cm2；茎段和顶芽以１cm长为宜。（2）接种：形态学下端插入培养基（如茎切段），叶平铺。不可将切块深埋于培养基中，以防无氧呼吸。（3）最佳培养基的筛选：主要因素: 基本培养基，植物生长物质的种类、浓度和配比。二、培养物的增殖（茎芽的增殖）是 离体繁殖 也称 微型繁殖 的关键步骤。1、通过愈伤组织诱导不定芽的形成不定芽（adventitious buds ）是指从非正常（叶腋和茎尖）出芽的位置上诱导而形成的芽，如从根、叶和愈伤组织中诱导的芽 。优点：繁殖速度快。不足：遗传不稳定性；再生能力会下降。2、增强腋芽生枝能力含CTK、GA和生长素等的培养基，可增强枝条腋芽生枝能力。特点：此途径开始速度慢，但经一个时期后，枝条数目以对数增加；此途径为茎尖培养，所以不发生基因型的变化。注意：（1）繁殖代数不是越多越好；（2）每次继代培养，应求增殖系数最高，即产生数量最多的增殖体。三、根的诱导培养一般在增殖的芽长到１－２厘米时，即可转入生根培养基培养。生根培养基配方的筛选原则：发根快、多而粗壮，茎基部不形成愈伤组织。生根培养基应去除CTK，降低生长素浓度，甚至在无激素的培养基上进行发根。四、试管苗的移栽1、壮苗；2、炼苗； 3、移栽的适期：小苗刚发根或幼根小于１厘米时为移栽适期。