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影响目的基因与载体连接效率的因素有哪些
如题所述
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推荐答案 2023-12-17
载体大小因素,连接酶的活性因素。
1、载体大小:载体越大,载体与目的片段的连接效率越低,所以对于较大的载体用同源重组连接成功率最高。
2、连接酶的活性:连接酶的活性对连接效率也有影响。
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为什么粘性末端有利于
基因载体与目的基因的连接
?
答:
一是有氢键连接所以连接的更容易 二是可以选择出特定的序列的连接
如果是平末端的话有DNA连接酶作用就可以将五碳糖的5‘端和3’端连在一起 而如果粘性末端的话必须有互补的碱基序列才能连接 可以防止质粒和目的基因的自身环化
【求助/交流】
目的基因与
表达
载体连接
时
有哪些
要点?
答:
2.片段
和载体
酶且要完全,确定大小没问题不过有些载体本身就很很难
连接
!建议在连接时,先加入载体和
目的基因
,85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。适当延长连接时间24小时以内都没问题的!如果还是不行,就试试对载体去磷酸化,每一步处理都要在结束后热变性,...
如何提高
目的基因与载体连接的效率
答:
要构建重组
载体的
目的就是把目的基因连到载体上,所以最有效的重组dna是目的基因-载体。目的基因-
目的基因和载体
-载体都是失败的结果,这种结果的产生相对导致基因-载体的结果产生率下降。一般做重组载体选择双酶切后
连接
,可以避免载体和目的基因的自连。目的基因的转化 根据不同的物种,将目的基因转化到...
基因工程中
目的基因与
运
载体
结合的成功率
答:
第一个是标记基因
,用来检测是否运载体进入到受体细胞里面。例子:运载体里面带有一个抵抗抗生素的基因。那么把所有受体细胞(比如,大肠杆菌)撒在培养皿上之后,培养皿中有抗生素,只有当运载体进入细胞之后才能抵抗抗生素,所以只有这些细胞才能存活。再者,要选择成功加入目的基因的运载体。在上面的例子中...
我要构建一个表达
载体
,请问
目的基因
插入片段有
什么
要求吗?怎样才能正 ...
答:
目的基因
前面必须有启动子啊。而启动子是和你的
载体
转入的宿主对应的。比如,你要转载体到大肠杆菌里面,目的基因前面得有原核启动子,
效率
越高越好。而,启动子和基因的距离会
影响
表达效率。
构建酵母双杂
载体
,其中一个
基因
老是
连接
不上是
什么原因
答:
造成假阴性
的原因
主要有两 方面:一是融合蛋白的表达对细胞有毒性。这时应该选择敏感性低的菌株或拷贝数低的
载体
。二是蛋白间的相互作用较弱,应选择高敏感的菌株及多拷贝载体。目前假阴性现象虽不是实验中的主要问题,但也应予以重视。转化
效率
是酵母双杂交文库筛选时成败的关键之一,特别是对低丰度cDNA...
如何提高
目的基因和载体的连接效率
答:
为了防止目的两端及载体的两端
连接
在一起,可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止
目的基因和载体的
自连。磁共振(MRI)成像具有良好的软组织对比度、高分辨成像和多参数扫描能力,且可以通过特异性磁共振分子探针来检测细胞分子水平的变化...
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