RNA提取的科学原理揭秘</
Trizol提取法犹如精密的魔法,它巧妙地运用了硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿的协同作用。GITC以强大的力量使蛋白质和RNase瞬间失去活性,接着通过离心,RNA如同珍贵的珍珠,停留在清澈的上层水相,而DNA和大部分蛋白质则沉于下方的有机相。进一步通过异丙醇的沉淀步骤,RNA得以完好保留,RNase的威胁也被DEPC的有效灭活消除。
RNA提取的必要装备</
氯仿</:用于分离RNA与DNA的神兵利器
异丙醇溶液</:沉淀RNA的关键角色
无RNA酶水</:保护RNA免受酶的侵害
75%乙醇</:清洗步骤中的得力助手
通风柜</:确保实验环境的安全与洁净
涡旋器</:高效混合溶液的得力工具
微量移液器</:精确操作的精密仪器
冷冻微量离心机</:分离步骤中的核心设备
RNA提取的详细步骤解析</
对于新鲜组织,每100毫克需配以1毫升Trizol,先用冰镇手术刀切碎,再用匀浆器温柔地搅拌。细胞提取则需在培养后立即进行,离心后弃去上清,用预冷的PBS清洗,每个107细胞加入1毫升Trizol。
在4°C的冷藏环境中,启动离心机,将组织或细胞混合液转移到无RNA酶EP管,静置5分钟,加入200ul氯仿,静置10分钟。
再次离心,13000 rpm,15分钟。分出上清后,取新EP管,加入500ul异丙醇,冷却待用。
离心后,取上层水相,重复沉淀步骤,用75%乙醇洗涤RNA,再离心去除水分。
最后,用DEPC处理过的去离子水溶解RNA,通过分光光度计来确认RNA的浓度和纯度,确保每一步都精确无误。