烟草花叶病毒病是怎样检验和检疫的?

如题所述

鉴别寄主:

①心叶烟:接种叶出现1~4mm圆形灰褐色枯斑。

②曼陀罗:接种叶出现2~4mm圆形灰褐枯斑。

③苋色藜:接种叶出现局部斑。

④烟草:系统花叶,后期出现大小不等的环斑或橡叶斑。

⑤三生烟N.tabacum‘Samsun’:接种后两周,系统花叶和褪绿斑。

⑥N.tabacum‘Xanthi’,‘Trapezond’,假酸浆:接种后第6d,表现局部坏死斑。

⑦矮牵牛品种Petunia hybrida‘Lavina’和天仙子:幼叶褪绿花叶,畸形,有些株系可致局部坏死斑。

⑧毛叶烟:接种第八天,接种叶形成局部坏死斑,以后,幼叶发展为系统脉坏死。

枯斑寄主:烟草品种Xanthi、Trapezond、心叶烟、假酸浆、曼陀罗、菜豆、苋色藜、昆诺藜、莙达莱、千日红。

体外稳定性:

①钝化温度:85~90℃(番茄分离物),95℃(菲律宾分离物),80℃(俄罗斯分离物),90℃(泰国分离物),88~93℃(日本分离物)。

稀释终点:10-6~10-7(番茄分离物)、10-4~10-5(地黄分离物)、10-4(啤酒花分离物)、109(菲律宾分离物)、10-6(泰国分离物)、10-6~10-7(日本分离物)。

体外存活期:2个月以上(番茄分离物),36~62d(地黄分离物),150d(啤酒花分离物),50年(菲律宾分离物),2月(俄罗斯分离物),5d(31℃)(泰国分离物),1年(日本分离物)。

血清学检测:中国分离物用粗提纯液免疫家兔制备抗血清,试管沉淀试验效价1/512,美国的TMV普通株系与本分离物抗血清呈阳性反应。应用10株TMV的单克隆抗体,对14个TMV分离物进行ELISA试验,从14株分离物中识别了8种抗原决定簇,并分为6个抗原型,同时将这14株分离物分别接种在Pelham的鉴别基因型的番茄品种上,比较了这些分离物的抗原型与基因型之间的关系,结果表明:0株系与抗原型Ⅳ、1株系与抗原型Ⅴ、1.2株系与抗原型血基本一致,但2和2a的三个分离物,基因型与抗原型之间无明显相关,说明应用单克隆抗体可以鉴别分布较广而稳定的株系,但也有一定局限性,对新产生的株系不能适用。

俄罗斯分离物:病毒的免疫原性和抗原性取决于病毒株系。远东除TMV-典型株系外,还有分自矮牵牛的TMV-p、天仙子的TMV-h、花烟草的TMV-n、皱叶剪秋箩 TMV-1(Gnutova R.V.et al.,1980)和鸢尾TMV-i以及水仙的 2株系(TMV-216,TMV-412)等株系(Chuyan A.H.et al.,1986);其中TMV-i和TMV-412强免疫原性;TMV-p,TMV-1和TMV-216中等免疫原性;TMV-h和TMV-n弱免疫原性。

制备兔血清按以下免疫日程:第一次免疫,0.25mg抗原加佐剂皮内注射;第二次1mg抗原加佐剂肌肉注射;第三次0.5mg抗原静脉注射。所得抗血清其特异抗体的最高效价(琼脂双扩散法):TMV-i为1∶2048,TMV-412为1∶128,TMV-p为1∶32,TMV-216为1∶32,TMV-1为1∶32,TMV-h为1∶8,TMV-n为1∶4。琼脂双扩散法和火箭免疫电泳反应结果表明:TMV-1和TMV-h抗原性最远缘,TMV-n和TMV-p居中,TMV-216、TMV-412和TMV-i分别有72%、80%、91%相同性。

泰国分离物:烟草TMV与辣椒TMV、番茄TMV、TMV-兰花株系,都有血清关系(Chaichuchot,1987:Sae Lim,1976)。

日本分离物:抗血清能使用,已知在TMV的典型株系,番茄株系和辣椒株系间存在共同和不同的抗原决定簇;与黄瓜绿斑驳花叶病毒、齿兰环斑病毒有血清学关系。

电镜观察:病毒粒子存于细胞质内,并列形成带状或晶状结块。还有晶体状和无定形内含体。

检疫危险性评价:本病的病原烟草花叶病毒,可由番茄病种子远距离传播,无介体,易接触传,对烟草和番茄生产可构成严重经济损失,季良进行危险性评价时危险度值10分,为高危检疫性有害生物。国内已普遍发生,应列为国内防治重点。

地理分布:中国、韩国、印尼、泰国、俄罗斯远东地区。

检疫国家地区:新西兰、匈牙利、澳大利亚、印度尼西亚、阿尔及利亚、冰岛、摩洛哥、斯洛伐克等。

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