第1个回答 2019-04-10
是做反转录还是real
time
PCR？
反转录的话，可以用oligoT做反转录的引物，得到全部的cDNA，然后再利用特异性的引物去扩增出目的基因。或者直接用特异性的引物去反转录出来目的基因的cDNA，然后再进行PCR扩增。
引物设计的话，跟平常的引物设计应遵循的原则差不多。不过由于是扩增目的基因的coding
sequence，所以引物设计的时候只能从coding
sequence的两端设计，这样才能得到全长的目的基因。设计时，除了要与cDNA互补的一段外，还需要另外添加Kozac序列和酶切位点序列以及保护碱基，这样扩增出来的PCR产物就可以直接进行酶切连接，连入相应的载体上了。
real
timePCR的话，同样根据需要扩增的片段设计引物就行了，没有位置的限制。