荧光定量PCR，RNA降解了，能否继续？

Question

我们课题组最近需要做荧光定量PCR，但是发现RNA降解了，还能进行下游的荧光定量PCR实验吗？因为检测基因是微量表达的基因，担心RNA的降解会影响基因的量。

Answer 1

加trizol之前为了使菌体裂解充分，一般使用液氮研磨的方式来破碎样本。样本中的转录本半衰期大概只有3~8分钟，你用溶菌酶处理的过程中，RNA的表达就发生了剧烈的变化，得到的RNA丰度已经不是你理想中的情况了。我们实验室一般用BIODAI离心技术，因为Trizol属于化学试剂，具有一定的毒性。楼主需要注意提RNA过程中，离心管、手套、kit等必须保证是无RNA酶的。