摘要 目的：探讨肝硬化患者中性粒细胞功能。方法：采用琼脂糖凝胶玻板法，对34例肝硬化患者进行中性粒细胞趋化功能测定。结果：肝硬化患者中性粒细胞趋化指数低于正常人(P＜0.01)；但肝硬化患者血清趋化指数与正常人血清的趋化指数差异无显著性(P＞0.05)，说明患者血清对中性粒细胞并无趋化因子活性。结论：体外测定中性粒细胞功能，对肝硬化患者的免疫病理研究具有一定的临床价值。
关键词 肝硬化 中性粒细胞 趋化指数
中性粒细胞(PMN)主要参与炎症反应过程，发挥抗感染的免疫作用。体外PMN趋化试验，是一种测定白细胞功能的常用方法。国内有关肝硬化患者外周血中性粒细胞趋化功能测定的报道不多，现将笔者测定的结果报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料 将受试者分为两组：(1)正常人组30名，为无心肝肺肾等脏器疾患的健康体检者，其中，男15名，女15名，年龄21～35岁。(2)患者组34例，均系肝炎后肝硬化，病程3～12年，年龄38～55岁，其中，男18例，女16例，诊断依据根据临床体征、实验室检查、B超、CT等证实。并据此分为肝硬化腹水组和无腹水组。
1.2 白细胞分离〔1〕 用比重为1.097的聚蔗糖-泛影葡胺的白细胞分离液，于其上层加肝素化的抗凝血(预先用等量的Hanks液稀释)2 ml于水平式离心机上，以2 500 r/min离心沉淀60 min，小心地吸取烟雾状白细胞层(此时PMN纯度可＞95%)，用Hanks液洗涤3次，将此悬液配成5×107/ml浓度。
1.3 PMN趋化性测定〔2〕 用含有10%的小牛血清与抗生素的Eagle培养液配制琼脂糖凝胶板，在凝胶板上打上、中、下三列小孔，上孔加趋化因子(为大肠杆菌24 h培养物离心后的上清液)，中孔加白细胞悬液(PMN 5×107/ml)，下孔加Eagle培养液作对照；37℃培育4 h后，测定PMN由中孔向上孔移动的距离，即趋化移动(A)和中孔向下孔移动的距离，即随机移动(B)，结果以趋化指数(A/B)表示。
2 结果
2.1 正常人组与肝硬化组外周血PMN趋化性测定结果 见表1。
2.2 肝硬化患者血清的趋化因子活性测定 分别用肝硬化组患者血清和正常人血清作为趋化因子，检测患者的PMN趋化功能。结果肝硬化患者血清趋化指数为2.1±0.25，正常人血清为2.2±0.31，两者差异无显著性(t=1.41,P＞0.05)，提示肝硬化患者血清对其PMN并无趋化因子活性。
表1 正常人和肝硬化组PMN趋化性测定结果(±s)
组别 n 趋化指数
正常人 30 2.4±0.40
肝硬化腹水组 20 1.9±0.36**
肝硬化无腹水组 14 2.0±0.38**
F — 11.68
P — ＜0.01
MS组内 — 0.147
q检验：与正常人组比较**P＜0.01
3 讨论
由表1可知，肝硬化患者不论其有无腹水，其外周血PMN趋化指数均显著地低于正常人组(P＜0.01)。一般来说，体外试验中发现的PMN功能障碍的主要原因是细胞本身膜的缺陷。肝硬化患者PMN趋化功能的减弱确切机制尚待进一步研究。文献证实〔2～4〕，肝硬化患者存在有不同程度的细胞免疫抑制，T淋巴细胞和B淋巴细胞比例紊乱，T淋巴细胞数减少和补体水平的变化，而补体活化片段、淋巴因子、抗体分子的分解产物等都参与趋化过程〔4〕。因此，笔者推测肝硬化患者体外PMN趋化功能的抑制可能与其免疫功能缺陷有关。
体外测定PMN趋化作用功能的常用方法为微孔滤膜法和琼脂糖玻板法，两者原理基本相同；但琼脂糖法所需设备简单，方便简易，结果可靠，较易在基层实验室推广应用。
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