什么是bisulfite sequencing PCR，BSP

Question

如题所述

Answer 1

　　Bisulfite Sequencing PCR，BSP是指BSP克隆测序法。

　　BSP实验原理：
　　BSP克隆测序法，是目前甲基化检测的金标准。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后再CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测得的序列与原始序列比对，统计甲基化位点及数量，并分析甲基化程度。

　　优点：
　　1、克服了MSP只能作定性研究，可做定量研究；
　　2、敏感性高，待测DNA中5-甲基胞嘧啶分布极不均衡也可检测；
　　3、引物设计相对简单。

　　缺点：
　　价格高。

　　送样要求：
　　1、组织样本：-20℃或-80℃低温冰箱中保存，液氮或者干冰运输；市内或短途运输可冰袋运输。若提供的材料为新鲜组织、血液细胞等生物材料，请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
　　2、DNA样本：体积≥20ul，浓度≥100ng/ul，DNA总量≥2ug，20℃保存，低温冰袋运输。
　　3、血液样本：要求保存于抗凝管中或冻存管中，体积大于2ml，请用干冰运送，保证DNA不降解。
　　4、样品为石蜡包埋组织切片的，要求提供10张组织切片光片（面积>10mm×10mm,厚度约5-10um）。

Answer 2

ation specific PCR,MSP）和硫化测序PCR（Bisulfite sequencing PCR,BSP）.
技术原理：
DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”转化为“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述转化,因此,根据经亚硫酸氢盐处理的DNA模板设计引物时,先输入感兴趣的DNA序列,程序将会显示2种序列:一种是输入的源DNA序列;另一种是硫化处理后的DNA序列,除了CpG岛上的5甲基胞嘧啶(5mC)之外,所有非甲基化的“C”都转换成了“T”,根据转化后的序列设计引物,进行BSP和MSP.
1.MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后,所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶无此改变.DNA的甲基化差异转变为序列差异,设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物,结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开.这种方法灵敏度高,对DNA的质和量需要少.
2.BSP：甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变,用一对特异性引物扩增后测序,再与DNA原始序列比对确定甲基化位点.测序法克服了只能针对单个位点检测,并且这些位点必须是限制性内切酶识别位点的缺点,可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测.本回答被提问者和网友采纳