ããBisulfite Sequencing PCRï¼BSPæ¯æBSPå
éæµåºæ³ã
ããBSPå®éªåçï¼
ããBSPå
éæµåºæ³ï¼æ¯ç®åç²åºåæ£æµçéæ åãç¨äºç¡«é
¸æ°¢çå¤çåºå ç»DNAï¼æææªåçç²åºåç
èå§å¶è¢«è½¬å为
å°¿å§å¶ï¼èç²åºåçèå§å¶ä¸åï¼éåå
CpGå²ä¸¤ç«¯è®¾è®¡å¼ç©è¿è¡PCRï¼å°ç®ç产ç©çº¯ååè¿è¡TAå
éï¼æ¯ä¸ªå
éæåé³æ§å
éæµåºï¼æåå°æµå¾çåºåä¸åå§åºåæ¯å¯¹ï¼ç»è®¡ç²åºåä½ç¹åæ°éï¼å¹¶åæç²åºåç¨åº¦ã
ããä¼ç¹ï¼
ãã1ãå
æäºMSPåªè½ä½
å®æ§ç 究ï¼å¯å
å®éç 究ï¼
ãã2ãæææ§é«ï¼å¾
æµDNAä¸5-ç²åºèå§å¶åå¸æä¸åè¡¡ä¹å¯æ£æµï¼
ãã3ãå¼ç©è®¾è®¡ç¸å¯¹ç®åã
ãã缺ç¹ï¼
ããä»·æ ¼é«ã
ããéæ ·è¦æ±ï¼
ãã1ãç»ç»æ ·æ¬ï¼-20âæ-80âä½æ¸©å°ç®±ä¸ä¿åï¼æ¶²æ°®æè
å¹²å°è¿è¾ï¼å¸å
æçéè¿è¾å¯å°è¢è¿è¾ãè¥æä¾çææ为æ°é²ç»ç»ãè¡æ¶²ç»èççç©ææï¼è¯·æä¾è¶³å¤æå2ug以ä¸åºå DNAçææéã
ãã2ãDNAæ ·æ¬ï¼ä½ç§¯â¥20ulï¼æµåº¦â¥100ng/ulï¼DNAæ»éâ¥2ugï¼20âä¿åï¼ä½æ¸©å°è¢è¿è¾ã
ãã3ãè¡æ¶²æ ·æ¬ï¼è¦æ±ä¿åäºæå管ä¸æå»å管ä¸ï¼ä½ç§¯å¤§äº2mlï¼è¯·ç¨å¹²å°è¿éï¼ä¿è¯DNAä¸é解ã
ãã4ãæ ·å为ç³è¡å
åç»ç»åççï¼è¦æ±æä¾10å¼ ç»ç»åçå
çï¼é¢ç§¯>10mmÃ10mm,å度约5-10umï¼ã