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RNA降解的判断标准
双链
RNA
需要什么酶
降解
?
答:
首先需要解旋酶
降解
成单链,然后需要
RNA
酶再降解。
如何去除DNA中的
RNA
?
答:
DNA提取过程中,去除
RNA的
常用方法是乙醇沉淀。因为RNA不溶于醇,乙醇能够消除RNA的水化层,使带负电荷的磷酸基团暴露出来。Na⁺之类的平衡离子能够与这些带电基团结合,在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。因此,只有在阳离子的量足以中和暴露的磷酸残基的电荷时才会发生乙醇沉淀。
如果HIV在逆转录过程中,不能有效
降解RNA
,则不能完成其基因组的扩增...
答:
逆转录过程中 以RNA为模版合成一条DNA链,合成的这一条DNA链是和之前的RNA链互补的,然后再
降解RNA
链 以之前合成的与RNA互补的DNA链为模版合成DNA的另一条互不链。如果RNA链不能降解,则合成的DNA链与RNA互补,不能进行另一DNA链的合成
如何评价总
RNA
或mRNA的质量
答:
电泳显示有无基因组DNA污染,有无
RNA降解
(28S, 18S条带);通过目测28S和18S条带的比例可以初步评价总RNA的质量。一般认为28S:18S >= 2可以初步
判定
总RNA完整性较好。跑电泳,RNA应出现清楚的两条Band (28S/18S rRNA),有时会有第三条band (5S rRNA),最上方不可出现DNA污染条带,28S/18S应...
简述完整性比较好的总
RNA
琼脂糖凝胶电泳图的特征?
答:
第二,真核生物有4种rRNA,它们分子大小分别是5S、5.8S、18S和28S。RNA电泳中可以依据核糖体
RNA的
大小大致
判断
条带的大小,RNA电泳条带上,应是28S在上,18S在下,且亮度为28S是18S的两倍。第三,如果三条rRNA不清晰甚至拖尾严重,说明总RNA也
降解
污染严重。提取质量差,不能用于后续实验。
细菌
RNA
试剂盒提完后有DNA污染,怎么去除
答:
DNase I 处理,酚氯仿抽,然后isopropanol沉淀,DEPC水溶。不需专门灭火,因为在反转录前有一个步骤是加热变性。一般是75度5min 后面取不超过40%反转录体积的RNA用于反转录,但反转录前最好检测一下RNA质量,免得浪费反转录酶。但是,这样做的前提的,RNA提得要好,浓度要高,这样免得
RNA降解
到不能用...
为什么提取
RNA
时RNA容易
降解
,提取DNA时RN
答:
“提取DNA比提取RNA容易,是因为DNA容易被降解”错误,正确的说法是“提取DNA比提取RNA容易,是因为RNA容易被降解”.因为环境中,充斥着各种RNA酶,很容易把
RNA降解
掉.在RNA提取实验中,用到的各种试剂和器皿一定要确保除去RNA酶,甚至不能把试剂暴露在空气中.操作不严格的话,可能得到的是RNA降解产物.DNA酶的...
如何评价总
RNA
或mRNA的质量
答:
电泳显示有无基因组DNA污染,有无
RNA降解
(28S, 18S条带);通过目测28S和18S条带的比例可以初步评价总RNA的质量。一般认为28S:18S >= 2可以初步
判定
总RNA完整性较好。跑电泳,RNA应出现清楚的两条Band (28S/18S rRNA),有时会有第三条band (5S rRNA),最上方不可出现DNA污染条带,28S/18S应...
提
rna
为什么容易
降解
答:
首先,RNA只有单链,不稳定。其次,
RNA的
2-OH还在,不耐碱,容易进攻自身的肽键。然后,RNA酶非常多,活性强,在自然界中。相对的,DNA酶激活的条件就严格很多。最后,RNA不耐高温。暂时想到这么一些~所以,提取RNA需要偏酸,低温,RNA酶失活的环境 ...
rna
干粉4℃会
降解
吗
答:
首先,RNA只有单链,不稳定。其次,
RNA的
2-OH还在,不耐碱,容易进攻自身的肽键。然后,RNA酶非常多,活性强,在自然界中。相对的,DNA酶激活的条件就严格很多。最后,RNA不耐高温。暂时想到这么一些~所以,提取RNA需要偏酸,低温,RNA酶失活的环境 ...
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