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3’UTR序列插入载体插反了,可以用荧光素酶检测么?
我采用PGL3-control载体构建miRNA靶基因载体,只有Xba1一个酶切位点,所以存在插入正反的问题,我测序显示插入序列反了。想问下若是3‘UTR不表达什么基因,插反了有影响么?
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第1个回答 2013-05-22
不行,这样5‘->3',就变成3'->5'了,miRNA结合不上去
相似回答
双
荧光素酶
应用实例(一)
答:
1、验证microRNA同mRNA靶向互作。将待测基因的3’
UTR序列插入
报告基因
载体,
再共转入该microRNA
,检测荧光素酶
活性下降,则提示为其靶序列。2、验证microRNA同lncRNA靶向互作。将待测lncRNA序列插入报告基因载体的3’UTR区域,检测荧光素酶活性。3、启动子结构分析。将启动子区域(约2k左右)进行...
荧光素酶
报告基因
检测
答:
从这两个图谱中可以发现,ppGL3-Basic这个
载体
主要是用于评估miRNA与靶基因3’
UTR
的结合,靶基因的3’UTR放在荧光素酶的后面,这个荧光素酶是荧火虫
荧光素酶,
而pRL-TK这个载体则表达海肾荧光素酶,将这两个质粒共同转染进入293细胞中来
检测荧光
时,pRL-TK这个质粒起到一个内参的作用。3、pmir-GLO将...
干货| 基因功能研究之双
荧光素酶
报告分析
答:
在具体应用中,例如在转录因子调控和microRNA-mRNA相互作用的研究中,科学家们通过将RNA的
3'UTR
嵌入
荧光素酶载体,
当microRNA与靶序列结合时
,荧光素酶
活性会显著下降,从而揭示了lncRNA与microRNA的互作模式。对于启动子结构的分析,双荧光素酶系统则通过分段突变
检测
法,揭示启动子活性的关键区域。实施双...
3utr
是构建到
荧光素酶
报告基因的上游还是下游
答:
种子区"的7个碱基进行定点突变,构建psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR突变载体。结果克隆获得的psiCHECK-2/PRL-1 3’
UTR载体
中DNA片段大小及序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确。"种子区"的7个碱基定点突变成功。结论成功构建了含PRL-1基因3’UTR区的
荧光素酶
报告基因载体及突变体,可用于后续功能研究。
双
荧光素酶
笔记
答:
答:首先要知道
,插入
的靶基因原始3’UTR的质粒叫野生型质粒,除此之外,还需要在萤火虫
荧光素酶3
’
UTR插入
miRNA结合位点突变的
序列载体,
这个质粒通常叫突变型质粒,最后还有各种对照载体,包括萤火虫荧光素酶空载体,miRNA空载体,还有海肾素
荧光载体,
以文献中的案例[4]说明,此文献使用了6组来进行验证,其分组以及分组说明如...
双
荧光素酶
报告基因
答:
miRNA主要通过作用于靶基因的3’
UTR
起作用,因此可以将目的基因的3’ UTR区域构建到
载体
报告基因萤火虫
荧光素酶
的后面,通过与miRNA共转染后
,检测
报告基因表达的变化来反映miRNA对目的基因的抑制作用。
双
荧光素酶
报告基因
检测
实验技术服务
答:
从而将待测启动子、
UTR
等序列与
荧光素酶
ORF框融合表达,再
检测
其发光强度,就能判断这些序列对蛋白表达的影响 为了减少实验误差,同时转染一个能稳定表达的 肾荧光素酶 的质粒作为内参,催化 腔肠素 氧化产生蓝光(波长460-540nm);所以叫双荧光素酶报告基因检测。 2 . 实验流程图 3 . 服务内容:双荧光素酶报告检测...
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