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western blot中一抗maa与封闭液的比例是多少?非诚勿扰
如题所述
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第1个回答 2015-07-17
感觉你说的这个问题应该是抗体稀释倍数吧?
是希望用封闭液稀释抗体吗?最主要的参考指标来自于抗体的说明书,使用说明书中建议的一抗稀释比例:
例如如果建议做Western时,一抗稀释比例是1:1000,那也就是说,1ul的抗体要加999uL的封闭液。这样得到就是1:1000的抗体稀释液了,可以用于实验。
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封闭液
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可以的,一抗本来就应该用
封闭液
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荧光
western blot
应注意些什么
答:
荧光
western blot
注意事项 抗体浓度应当优化,在几种不同稀释度的抗体中孵育膜。选择信噪比最高的稀释度。从化学发光转到荧光检测时,一抗浓度应当增加 许多
封闭液
都成功用于荧光检测。建议使用5% 酪蛋白、最多5%的脱脂奶粉,或最多3% BSA,溶于TBST中。缓冲
液中的
颗粒可能停留在膜上,并造成荧光假象。...
【
Western Blot
】干货!WB步骤分享
视频时间 1:50
做好
westernblot
需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
以一块膜为例,
封闭
5ml+稀释一抗4ml+稀释二抗4ml,需要13ml,则配制15ml。 5% BSA
溶液
(w/v):配制15ml 5% BSA溶液(w/v),称取0.75g BSA晶体,溶于15mlTBST中,漩涡振荡器混匀,现用现配,4℃保存(若目的蛋白为磷酸化蛋白时配制)。 5%牛奶(w/v):配制15ml 5%牛奶(w/v),称取0.75g脱脂奶粉,溶于15ml TBST中...
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一抗的
说明书,按照适当
比例
用
Western一抗
稀释液稀释一抗。 用微型台式真空泵吸尽
封闭液
,立即加入稀释好的一抗,室温或4℃在侧摆摇床上...
Acr/Bic作用
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Western-Blot
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封闭液中的
蛋白可以与固相载体表面的空白位置结合,同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上,因为有“填补”和覆盖“蛋白结合位点以避免
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