第1个回答 2022-06-29
基因克隆 ：也叫分子克隆，是在体外对DNA分子按照既定的目的和方案进行人工重组，将重组分子导入到合适的受体细胞中，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得DNA分子大量复制，并使受体细胞获得新的遗传特征的过程。
举个例子来说，A基因是调控小鼠褪黑素的分泌的，我想要完全抑制小鼠褪黑素的分泌，观察褪黑素分泌抑制后小鼠的身体状况。我们就需要在体外重组这个A基因（使A基因能够抑制褪黑素分泌），并进行大量的复制，然后将复制好的重组的A基因连接到相应的表达载体上，然后再将这个载体转入受体细胞中或者小鼠内，若实验成功的话，小鼠的褪黑素会被完全抑制分泌，褪黑素被完全抑制了的小鼠，身体状况可能会出现相应的问题。
而拿着一个基因要怎么去分析，去克隆自己想要的片段，就需要根据自己的实验需求来进行了。我今天就给大家讲讲ORF克隆和cDNA 克隆。
cDNA 克隆 ：是全长转录本的cDNA克隆，既包含了全长蛋白质的编码序列，也包含 5' 和 3' UTR非编码序列，不能直接用于转染细胞表达，需要把5’ 及3’ UTR截去然后将表达框连接到构建好的表达载体才可以进行转染细胞并表达。
ORF克隆 ：一个全长ORF（开放阅读框）克隆，是指一个插入有编码全长 蛋白质 的 DNA 片断的质粒。该插入DNA 片断只含有编码一个全长蛋白质的序列（从起始密码到终止密码），而不包含有5′或3′端的非翻译区（UTRs）或内含子。
怎么？概念不好理解？没事，看下面的图：ORF就是基因的开放阅读框，没有5' 和3' UTR序列。是不是感觉很简单呢？
cDNA 克隆最主要的用途就是大量复制，并保存单一cDNA信息，构建cDNA文库，亚克隆等。也由于其5’UTR非编码区容易形成复杂的二级结构，在蛋白质翻译时容易出现问题。因此，cDNA克隆载体必须去掉5' 和3' UTR序列后，再连接到对应的表达载体中才能够在受体细胞中进行表达。
而ORF克隆就没有那么复杂了，它是cDNA开放阅读框区域的序列，无5' 和3' UTR序列，可直接在宿主细胞中进行表达，更为省时省力。所以大家在选择哪一种克隆的时候，要想好自己要做什么实验，以及所要考虑的因素比如价格，时间，操作等。